24小时热门版块排行榜    

查看: 1251  |  回复: 2

xiaoqiang100

铁虫 (小有名气)

[求助] ELISA测抗体效价的准确性问题

我用ELISA夹心法测抗体效价,底物是蛋白,一抗是我们要测的抗体,二抗是山羊抗兔的HRP标记的,显色物为OPD。但是我感觉,OPD反应的时间越长,OPD显色就越深,O.D值就越高,这样我们用软件分析得出的抗体的效价就不一样。打个比方说:前面所有的条件完全相同,在显色这一步,我有的显色5分钟,有的显色10分钟。因为显色10分钟的O.D值比五分钟大,那么我算出来的同一种抗体的效价就会不同。这个问题该如何解决呢?另外,我们的抗体还没有商业化抗体,所以无法利用现有的商业抗体进行校准。
回复此楼
谁知道一个大学学物理,但研究生阶段天天养细胞的寂寞!?
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zlee2136

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

xiaoqiang100(金币+2): 我将具体条件写了一下,还请得到你的帮助 2011-09-09 09:12:38
你这种方法应该叫间接ELISA法,请问你检测的抗体有没有做一个稀释梯度?说一个抗体的效价有多少,应该同时要说明你的检测条件,比如:抗原包板浓度,包板时间,一抗稀释度,二抗使用浓度,底物显色时间,各步反应时间等等!不能一概而论,每个实验室的标准都不太一样!
2楼2011-09-08 22:55:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoqiang100

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
1楼: Originally posted by xiaoqiang100 at 2011-09-08 21:15:46:
我用ELISA夹心法测抗体效价,底物是蛋白,一抗是我们要测的抗体,二抗是山羊抗兔的HRP标记的,显色物为OPD。但是我感觉,OPD反应的时间越长,OPD显色就越深,O.D值就越高,这样我们用软件分析得出的抗体的效价就不 ...

好的,我将具体条件说一下。
我抗原包被的浓度为8微克/孔,37℃孵育2小时;
百分之五的牛血清蛋白封闭,37℃孵育2小时;
梯度稀释抗体血清,稀释梯度为1:100至1:1000000000,37℃孵育2小时;
PBST洗5次,每次5min;
加入山羊抗兔二抗(我们做的一抗是兔源的),稀释2000,37℃孵育2小时;
PBST洗5次,每次5min;
OPD显色(配方为0.05%w/v的OPD,0.1%v/v的过氧化氢,溶解在ph5.3的柠檬酸缓冲液中);
1M的硫酸中止反应;
5min内测量O.D值。
谁知道一个大学学物理,但研究生阶段天天养细胞的寂寞!?
3楼2011-09-09 09:11:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xiaoqiang100 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工(085600)296求调剂 +9 稻妻小编 2026-03-26 9/450 2026-03-26 16:16 by 不吃魚的貓
[考研] 22 350 本科985求调剂,求老登收留 +4 李轶男003 2026-03-20 4/200 2026-03-26 16:05 by 哇啦啦啦xtj
[考研] 一志愿厦门大学化学学硕307求调剂 +6 y7czhao 2026-03-26 6/300 2026-03-26 15:42 by zyxyz0804
[考研] 一志愿河工大 081700 276求调剂 +4 地球绕着太阳转 2026-03-23 4/200 2026-03-26 14:27 by zzll406
[考研] 315分求调剂 +5 26考研上岸版26 2026-03-26 5/250 2026-03-26 12:11 by laoshidan
[考研] 303求调剂 +6 蓝山月 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:47 by 418490947
[考研] 考研调剂 +6 来好运来来来 2026-03-21 7/350 2026-03-25 22:43 by 418490947
[考研] 308求调剂 +5 墨墨漠 2026-03-25 5/250 2026-03-25 22:19 by 544594351
[考研] 考研一志愿苏州大学初始315(英一)求调剂 +3 sbdksD 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:16 by xcjcqu
[考研] 生物技术与工程 +3 1294608413 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:02 by 1294608413
[考研] 293求调剂 +7 加一一九 2026-03-24 7/350 2026-03-25 12:02 by userper
[考研] 086003食品工程求调剂 +6 淼淼111 2026-03-24 6/300 2026-03-25 10:29 by 3Strings
[考研] 材料专硕找调剂 +5 哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:07 by 了了了了。。
[考研] 307求调剂 +5 超级伊昂大王 2026-03-24 5/250 2026-03-24 15:46 by 星空星月
[考研] 344求调剂 +3 desto 2026-03-24 3/150 2026-03-24 10:09 by 搏击518
[论文投稿] 急发核心期刊论文 +3 贤达问津 2026-03-23 5/250 2026-03-23 17:13 by 妹子不好惹
[考研] 求调剂一志愿海大,0703化学学硕304分,有大创项目,四级已过 +6 幸运哩哩 2026-03-22 10/500 2026-03-22 20:10 by edmund7
[考研] 260求调剂 +3 朱芷琳 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:12 by 朱芷琳
[考研] 330求调剂0854 +3 assdll 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:01 by 搏击518
[考研] 353求调剂 +3 拉钩不许变 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:56 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见