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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 为什么我P不出东西来呀
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天鸟

木虫 (正式写手)

[交流] 为什么我P不出东西来呀 已有4人参与

我提取土壤的微生物总DNA后，在p特定功能的细菌群时，总是P不出来东西。我的引物是按照他们发表的文章的序列，就是体系和条件有些差别。试过几对引物都是不行。我觉得不可能是环境不存在这类细菌。是总DNA的质量不好的原因，还是体系或者条件不对呢!？大家觉得什么地方最容易出问题呀
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快乐生活，我快乐
1楼 2011-09-08 19:20:55
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wqj1988926

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
有可能你的目的菌在环境中较少，因此提取的目的dna也就较少
楼至可以试试增加pcr循环数或者以pcr产物为模板再进行pcr
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风雪夜归人
5楼2011-09-13 08:21:40
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wqj1988926

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
最可的应该是提取dna的步骤，楼主最好能详细说下你的实验过程
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天鸟
风雪夜归人
3楼2011-09-12 21:50:20
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天鸟

木虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by wqj1988926 at 2011-09-12 21:50:20:
最可的应该是提取dna的步骤，楼主最好能详细说下你的实验过程

我用一个普通的试剂盒提取微生物中DNA，然后目前试了4对引物，还是没有PCR出来功能基因，我也尝试了下不同退火温度，还是不行，体系没有变化过。谢谢
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快乐生活，我快乐
4楼2011-09-13 08:17:35
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天鸟

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wqj1988926 at 2011-09-13 08:21:40:
有可能你的目的菌在环境中较少，因此提取的目的dna也就较少
楼至可以试试增加pcr循环数或者以pcr产物为模板再进行pcr

谢谢交流，这个方法也尝试了，我有用巢式的方法和二次PCR的方法都不行
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快乐生活，我快乐
6楼2011-09-13 17:39:46
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