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天鸟

木虫 (正式写手)

[交流] 为什么我P不出东西来呀 已有4人参与

我提取土壤的微生物总DNA后,在p特定功能的细菌群时,总是P不出来东西。我的引物是按照他们发表的文章的序列,就是体系和条件有些差别。试过几对引物都是不行。我觉得不可能是环境不存在这类细菌。是总DNA的质量不好的原因,还是体系或者条件不对呢!?大家觉得什么地方最容易出问题呀
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快乐生活,我快乐
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syw2005

铁杆木虫 (小有名气)

一个一个试
新疆胡杨
2楼2011-09-12 11:35:39
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wqj1988926

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
最可的应该是提取dna的步骤,楼主最好能详细说下你的实验过程

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风雪夜归人
3楼2011-09-12 21:50:20
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天鸟

木虫 (正式写手)

送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by wqj1988926 at 2011-09-12 21:50:20:
最可的应该是提取dna的步骤,楼主最好能详细说下你的实验过程

我用一个普通的试剂盒提取微生物中DNA,然后目前试了4对引物,还是没有PCR出来功能基因,我也尝试了下不同退火温度,还是不行,体系没有变化过。谢谢
快乐生活,我快乐
4楼2011-09-13 08:17:35
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wqj1988926

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
有可能你的目的菌在环境中较少,因此提取的目的dna也就较少
楼至可以试试增加pcr循环数或者以pcr产物为模板再进行pcr
风雪夜归人
5楼2011-09-13 08:21:40
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天鸟

木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by wqj1988926 at 2011-09-13 08:21:40:
有可能你的目的菌在环境中较少,因此提取的目的dna也就较少
楼至可以试试增加pcr循环数或者以pcr产物为模板再进行pcr

谢谢交流,这个方法也尝试了,我有用巢式的方法和二次PCR的方法都不行
快乐生活,我快乐
6楼2011-09-13 17:39:46
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翰章

新虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
这是分子生物试验中经常遇到的问题,耐心的试各种条件,或者你可以将镁离子的含量提高一些,或者DNA的含量提高一些,增加一些模板,增加酶的活性,或许可以成功,或者你还可以多试试几家公司的相关试剂
7楼2011-09-14 10:31:04
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翰章

新虫 (小有名气)

这是分子生物试验中经常遇到的问题,耐心的试各种条件,或者你可以将镁离子的含量提高一些,或者DNA的含量提高一些,增加一些模板,增加酶的活性,或许可以成功,或者你还可以多试试几家公司的相关试剂
8楼2011-09-14 10:31:18
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匿名

用户注销 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
本帖仅楼主可见
9楼2011-10-18 14:52:19
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