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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » southern杂交检测基因拷贝数的原理是什么？
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阿淼阿淼

新虫 (初入文坛)

[求助] southern杂交检测基因拷贝数的原理是什么？

在转基因植株中，southern杂交一般都是检测外源目的基因是否转入目标植物，但是有用southern杂交检测植物基因拷贝数，请问原理是什么？是根据怎样的实验结果来判定拷贝数呢？我不太明白，请求各位高手说明一下，感谢！！！
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1楼 2011-09-06 10:32:57
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

【答案】应助回帖

阿淼阿淼(金币+2): 谢谢您 2011-09-07 11:31:26
1 外源基因转入同一或者相近的位点概率很小。
2 基因组酶切产物的大小对于外源基因的插入位点具有不确定性。
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真相是最大的奢侈品
2楼2011-09-06 11:21:52
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根
引用回帖:
4楼: Originally posted by 阿淼阿淼 at 2011-09-07 08:14:26:
如果不是外源基因呢？检测植物本身的基因拷贝数呢？
是根据条带数还是灰度判断呢？

我们研究的是异源多倍体物种，一般一个基因有多同源拷贝，在不同染色体上，还是根据条带数来确定拷贝数。有的时候在同一个位点，有同源簇（抗病基因多），这样灰度会大一些。
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真相是最大的奢侈品
6楼2011-09-07 08:43:41
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 阿淼阿淼 at 2011-09-07 10:00:29:
啊谢谢您！
是说如果有3个拷贝就会出现3条条带吗?是根据不同的同源拷贝片会出现在不同大小的基因组酶切产物中吗？

是的。但是一般用几种酶切进行比较。
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真相是最大的奢侈品
8楼2011-09-07 10:16:21
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普通回帖

lx33140

新虫 (初入文坛)
阿淼~这好深奥~不过我顶你。。 - - 猜猜我是谁。。。
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3楼2011-09-06 15:02:00
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阿淼阿淼

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wanhscn at 2011-09-06 11:21:52:
1 外源基因转入同一或者相近的位点概率很小。
2 基因组酶切产物的大小对于外源基因的插入位点具有不确定性。

如果不是外源基因呢？检测植物本身的基因拷贝数呢？
是根据条带数还是灰度判断呢？
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4楼2011-09-07 08:14:26
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阿淼阿淼

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lx33140 at 2011-09-06 15:02:00:
阿淼~这好深奥~不过我顶你。。 - - 猜猜我是谁。。。

必须知道你是谁~哈哈~
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5楼2011-09-07 08:15:38
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阿淼阿淼

新虫 (初入文坛)
★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励交流 2011-09-07 10:29:57
引用回帖:
6楼: Originally posted by wanhscn at 2011-09-07 08:43:41:
我们研究的是异源多倍体物种，一般一个基因有多同源拷贝，在不同染色体上，还是根据条带数来确定拷贝数。有的时候在同一个位点，有同源簇（抗病基因多），这样灰度会大一些。

啊谢谢您！
是说如果有3个拷贝就会出现3条条带吗?是根据不同的同源拷贝片会出现在不同大小的基因组酶切产物中吗？
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7楼2011-09-07 10:00:29
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阿淼阿淼

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by wanhscn at 2011-09-07 10:16:21:
是的。但是一般用几种酶切进行比较。

谢谢！非常感谢您的耐心解答！
还有一些文献上是用单酶切，往往只出现一个条带，然后用与标准品根据灰度值来计算判定拷贝数，这样也是可以的吗？这两种方法的区别和适用对象又是什么呢？可以结合在一起吗？就是用几种酶切，所出现的多条条带的灰度值也有差别
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9楼2011-09-07 11:01:16
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阿淼阿淼

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by wanhscn at 2011-09-07 10:16:21:
是的。但是一般用几种酶切进行比较。

谢谢！非常感谢您的耐心解答！
还有一些文献上是用单酶切，往往只出现一个条带，然后用与标准品根据灰度值来计算判定拷贝数，这样也是可以的吗？这两种方法的区别和适用对象又是什么呢？可以结合在一起吗？就是用几种酶切，所出现的多条条带的灰度值也有差别
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10楼2011-09-07 11:06:25
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