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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » southern杂交检测基因拷贝数的原理是什么？
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根
引用回帖:
10楼: Originally posted by 阿淼阿淼 at 2011-09-07 11:06:25:
谢谢！非常感谢您的耐心解答！
还有一些文献上是用单酶切，往往只出现一个条带，然后用与标准品根据灰度值来计算判定拷贝数，这样也是可以的吗？这两种方法的区别和适用对象又是什么呢？可以结合在一起吗？就是 ...

我也是单酶切，不过使用几种酶单独切的。
这个问题需待高人回答！
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真相是最大的奢侈品
11楼2011-09-07 11:55:13
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根
引用回帖:
10楼: Originally posted by 阿淼阿淼 at 2011-09-07 11:06:25:
谢谢！非常感谢您的耐心解答！
还有一些文献上是用单酶切，往往只出现一个条带，然后用与标准品根据灰度值来计算判定拷贝数，这样也是可以的吗？这两种方法的区别和适用对象又是什么呢？可以结合在一起吗？就是 ...

我也是单酶切，不过使用几种酶单独切的。
这个问题需待高人回答！
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真相是最大的奢侈品
12楼2011-09-07 11:56:11
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阿淼阿淼

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by wanhscn at 2011-09-07 11:56:11:
我也是单酶切，不过使用几种酶单独切的。
这个问题需待高人回答！

谢谢
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13楼2011-09-07 12:53:02
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根
引用回帖:
10楼: Originally posted by 阿淼阿淼 at 2011-09-07 11:06:25:
谢谢！非常感谢您的耐心解答！
还有一些文献上是用单酶切，往往只出现一个条带，然后用与标准品根据灰度值来计算判定拷贝数，这样也是可以的吗？这两种方法的区别和适用对象又是什么呢？可以结合在一起吗？就是 ...

我们做的是植物细胞，所以觉得首选是看条带个数。灰度值跟你上样的量以及基因组提取好坏有关系，不太好控制，这个我不敢打包票。根据灰度还不如用实时荧光定量PCR分析拷贝数，这个毕竟还有加了个个内参。
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真相是最大的奢侈品
14楼2011-09-07 16:43:21
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阿淼阿淼

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by wanhscn at 2011-09-07 16:43:21:
我们做的是植物细胞，所以觉得首选是看条带个数。灰度值跟你上样的量以及基因组提取好坏有关系，不太好控制，这个我不敢打包票。根据灰度还不如用实时荧光定量PCR分析拷贝数，这个毕竟还有加了个个内参。

原来是这样，非常感谢您！
还想请教的是，您在实验中选择的标记是什么呢？学姐在southern blot实验中，用地高辛标记探针，结果只有目的基因的PCR产物出现了条带，而植株的gDNA却没有条带，可能地高辛灵敏度不够高或者植株基因组中目的基因的量太少有关吧
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15楼2011-09-08 10:47:13
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根
引用回帖:
15楼: Originally posted by 阿淼阿淼 at 2011-09-08 10:47:13:
原来是这样，非常感谢您！
还想请教的是，您在实验中选择的标记是什么呢？学姐在southern blot实验中，用地高辛标记探针，结果只有目的基因的PCR产物出现了条带，而植株的gDNA却没有条带，可能地高辛灵敏度不够 ...

这种用同位素
之前BAC文库用的是地高辛
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真相是最大的奢侈品
16楼2011-09-08 10:55:21
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阿淼阿淼

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
16楼: Originally posted by wanhscn at 2011-09-08 10:55:21:
这种用同位素
之前BAC文库用的是地高辛

啊，谢谢！同位素污染比较大，对实验室的要求也比较高吧
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17楼2011-09-08 11:14:29
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根
引用回帖:
17楼: Originally posted by 阿淼阿淼 at 2011-09-08 11:14:29:
啊，谢谢！同位素污染比较大，对实验室的要求也比较高吧

我们专门腾出一个小房间做,平时每人愿意进,门也紧闭. 做完后热水处理用过的器具 .

[ Last edited by wanhscn on 2011-9-8 at 11:17 ]
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真相是最大的奢侈品
18楼2011-09-08 11:16:54
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hongjun0699

新虫 (初入文坛)
лл
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19楼2014-09-11 22:09:11
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康康1991
20楼2015-08-23 20:52:35
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