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阿淼阿淼

新虫 (初入文坛)

[求助] southern杂交检测基因拷贝数的原理是什么?

在转基因植株中,southern杂交一般都是检测外源目的基因是否转入目标植物,但是有用southern杂交检测植物基因拷贝数,请问原理是什么?是根据怎样的实验结果来判定拷贝数呢?我不太明白,请求各位高手说明一下,感谢!!!
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阿淼阿淼

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
14楼: Originally posted by wanhscn at 2011-09-07 16:43:21:
我们做的是植物细胞,所以觉得首选是看条带个数。灰度值跟你上样的量以及基因组提取好坏有关系,不太好控制,这个我不敢打包票。根据灰度还不如用实时荧光定量PCR分析拷贝数,这个毕竟还有加了个个内参。

原来是这样,非常感谢您!
还想请教的是,您在实验中选择的标记是什么呢?学姐在southern blot实验中,用地高辛标记探针,结果只有目的基因的PCR产物出现了条带,而植株的gDNA却没有条带,可能地高辛灵敏度不够高或者植株基因组中目的基因的量太少有关吧
15楼2011-09-08 10:47:13
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

【答案】应助回帖

阿淼阿淼(金币+2): 谢谢您 2011-09-07 11:31:26
1 外源基因转入同一或者相近的位点概率很小。
2 基因组酶切产物的大小对于外源基因的插入位点具有不确定性。
真相是最大的奢侈品
2楼2011-09-06 11:21:52
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lx33140

新虫 (初入文坛)

阿淼~这好深奥~不过我顶你。。 - - 猜猜我是谁。。。
3楼2011-09-06 15:02:00
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阿淼阿淼

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wanhscn at 2011-09-06 11:21:52:
1 外源基因转入同一或者相近的位点概率很小。
2 基因组酶切产物的大小对于外源基因的插入位点具有不确定性。

如果不是外源基因呢?检测植物本身的基因拷贝数呢?
是根据条带数还是灰度判断呢?
4楼2011-09-07 08:14:26
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