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tdong06

木虫 (正式写手)

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[求助] 植物基因表达分析

我是想看下植物基因的表达情况，现在做好了RT-PCR，标准曲线应该怎么做才合理呢？是要将做RT-PCR的几个样的CDNA混合好进行稀释梯度，然后再做每个基因的标准曲线，还是应该每个样做一个标准曲线呢？还有就是得到了CT值之后，如何来做标准曲线？请各位赐教！不胜感激！

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1楼2011-09-05 19:15:57

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wywqjj521

新虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 欢迎新虫交流 2011-09-07 17:22:23
tdong06(金币+10): 2011-09-07 17:28:02

可以使用荧光定量PCR来做个相对定量实验设计，进行植物基因表达分析。选一个管家基因作为内参，一般植物中选择Actin基因，将你的样品的RNA反转录后，一般按10倍梯度进行稀释，制作标准曲线，内参基因一条标线，每检测一个基因做一条标线，然后结果根据-Delta Delta Ct法进行基因表达水平分析。现在常规的荧光定量软件均可以直接根据荧光信号结果，做出相应的图。