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tdong06

木虫 (正式写手)

[求助] 植物基因表达分析

我是想看下植物基因的表达情况,现在做好了RT-PCR,标准曲线应该怎么做才合理呢?是要将做RT-PCR的几个样的CDNA混合好进行稀释梯度,然后再做每个基因的标准曲线,还是应该每个样做一个标准曲线呢?还有就是得到了CT值之后,如何来做标准曲线?请各位赐教!不胜感激!
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wansanlian

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我也想做,但是一直都不懂啊。如果你知道了也麻烦告诉我下~呵呵~
乱花渐欲迷人眼
2楼2011-09-06 09:51:10
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根


西瓜(金币+1): 斑竹很热心哈 2011-09-07 17:21:15
引用回帖:
2楼: Originally posted by wansanlian at 2011-09-06 09:51:10:
我也想做,但是一直都不懂啊。如果你知道了也麻烦告诉我下~呵呵~

http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3234286&fpage=1
到里面找找
真相是最大的奢侈品
3楼2011-09-06 09:54:43
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tdong06

木虫 (正式写手)

好吧,我摸的一阵,现在有点头绪,但是还没有到能教人的地步啊。完全搞清楚了告诉你啊。留个邮箱吧。
4楼2011-09-06 22:30:23
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wywqjj521

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 欢迎新虫交流 2011-09-07 17:22:23
tdong06(金币+10): 2011-09-07 17:28:02
可以使用荧光定量PCR来做个相对定量实验设计,进行植物基因表达分析。选一个管家基因作为内参,一般植物中选择Actin基因,将你的样品的RNA反转录后,一般按10倍梯度进行稀释,制作标准曲线,内参基因一条标线,每检测一个基因做一条标线,然后结果根据-Delta Delta Ct法进行基因表达水平分析。现在常规的荧光定量软件均可以直接根据荧光信号结果,做出相应的图。
5楼2011-09-07 14:48:25
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