应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 重叠PCR克隆大片段
51/1返回列表
查看: 1693  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

microz

新虫 (初入文坛)

[求助] 重叠PCR克隆大片段

因为基因组GC含量很高，有一个3000bp的大片段怎么也扩增不出来。

想分成两段，采用重叠PCR试试。

问一下重叠部分最短20bp，最长能有多少？是否没有限制？

或者我分别克隆两个片段，这两个片段之间有几百bp的重叠，是否依然能实现PCR扩增？

[ Last edited by microz on 2011-9-1 at 20:45 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2011-09-01 20:43:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xbl3688
2楼2011-09-01 21:22:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

microz

新虫 (初入文坛)
没人做过吗？

求解答
赞一下 回复此楼
3楼2011-09-05 21:02:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

【答案】应助回帖

GC含量高，我以前用的是KOD专门扩高级结构的（可扩10K），测序的时候也是送到大连宝生物的，150元一个反应。
重叠20bp太少，就怕你们老板不信结果。
赞一下 回复此楼
真相是最大的奢侈品
4楼2011-09-05 21:09:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

瓶儿花

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
wanhscn(金币+3): ok 2011-09-05 21:19:13
可以重叠的，重叠一般可以到200bp左右，GC含量高的话就用TAKARA的LA Taq酶扩就可以了。长的片段一般是采用分段扩增的方式，再拼凑起来。一般每一段都做下TA克隆，克隆到T载体上效果比较好，直接PCR结果扩的话可能会信号不大好。我是做链霉菌的，GC含量非常的高，就是用的TAKARA的LA Taq酶扩增的，目的片段为2400bp，分三段来扩，每一段约为1000bp，每次测序都正反方向测通，防止因测序信号不好而造成的碱基错误。测序好了再用软件拼接就可以得到完整的基因的序列了。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-09-05 21:15:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 microz 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 考研化学学硕调剂，一志愿985 +5 张vvvv 2026-03-15 7/350 2026-03-21 19:23 by ColorlessPI
[考研] 0703化学调剂 ，六级已过，有科研经历 +14 曦熙兮 2026-03-15 14/700 2026-03-21 19:12 by ColorlessPI
[考研] 工科0856求调剂 +3 沐析汀汀 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:30 by 学员8dgXkO
[考研] 297求调剂 +11 戏精丹丹丹 2026-03-17 12/600 2026-03-21 17:47 by ColorlessPI
[考研] 298求调剂 +4 上岸6666@ 2026-03-20 4/200 2026-03-21 17:14 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-20 7/350 2026-03-21 16:36 by barlinike
[考研] 299求调剂 +4 某某某某位 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:30 by barlinike
[考研] 22 350 本科985求调剂，求老登收留 +3 李轶男003 2026-03-20 3/150 2026-03-21 13:28 by 搏击518
[考研] 一志愿山大07化学 332分 四六级已过 本科山东双非 求调剂！ +3 不想理你 2026-03-16 3/150 2026-03-21 03:59 by JourneyLucky
[考研] 材料工程（专）一志愿985 初试335求调剂 +3 hiloiy 2026-03-17 4/200 2026-03-21 03:04 by JourneyLucky
[考研] 初始318分求调剂（有工作经验） +3 1911236844 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:33 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中国石油大学（华东） 本科齐鲁工业大学 +3 石能伟 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:22 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华南师大 070300（化学）304分求调剂 +3 0703武芊慧雪304 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:48 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交大，求调剂 +5 材化逐梦人 2026-03-18 5/250 2026-03-21 00:26 by JourneyLucky
[考研] 296求调剂 +6 www_q 2026-03-18 10/500 2026-03-20 23:56 by JourneyLucky
[考研] 中南大学化学学硕337求调剂 +3 niko- 2026-03-19 6/300 2026-03-20 21:58 by luoyongfeng
[考研] 319求调剂 +3 小力气珂珂 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:47 by JourneyLucky
[考研] 0703化学调剂 +5 pupcoco 2026-03-17 8/400 2026-03-19 13:58 by houyaoxu
[考研] 085600材料与化工求调剂 +6 绪幸与子 2026-03-17 6/300 2026-03-19 13:27 by houyaoxu
[考研] 344求调剂 +6 knight344 2026-03-16 7/350 2026-03-18 20:13 by walc
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭