| 查看: 1682 | 回复: 4 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
重叠PCR克隆大片段
|
||
|
因为基因组GC含量很高，有一个3000bp的大片段怎么也扩增不出来。 想分成两段，采用重叠PCR试试。 问一下重叠部分最短20bp，最长能有多少？是否没有限制？ 或者我分别克隆两个片段，这两个片段之间有几百bp的重叠，是否依然能实现PCR扩增？ [ Last edited by microz on 2011-9-1 at 20:45 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有70人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
3楼2011-09-05 21:02:42
wanhscn
木虫 (职业作家)
哲学@草根
- MolEPI: 26
- 应助: 53 (初中生)
- 贵宾: 0.87
- 金币: 3895.7
- 散金: 877
- 红花: 27
- 沙发: 14
- 帖子: 3642
- 在线: 526.2小时
- 虫号: 1376762
- 注册: 2011-08-22
- 性别: GG
- 专业: 植物遗传学
4楼2011-09-05 21:09:53
【答案】应助回帖
★ ★ ★
wanhscn(金币+3): ok 2011-09-05 21:19:13
wanhscn(金币+3): ok 2011-09-05 21:19:13
| 可以重叠的，重叠一般可以到200bp左右，GC含量高的话就用TAKARA的LA Taq酶扩就可以了。长的片段一般是采用分段扩增的方式，再拼凑起来。一般每一段都做下TA克隆，克隆到T载体上效果比较好，直接PCR结果扩的话可能会信号不大好。我是做链霉菌的，GC含量非常的高，就是用的TAKARA的LA Taq酶扩增的，目的片段为2400bp，分三段来扩，每一段约为1000bp，每次测序都正反方向测通，防止因测序信号不好而造成的碱基错误。测序好了再用软件拼接就可以得到完整的基因的序列了。 |
5楼2011-09-05 21:15:47
10