应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 测序后的DNA序列与预测的有几个碱基不同，怎么办
192/2返回列表上一页12
查看: 3846  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

jushi0619

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 欢迎新虫交流 2011-08-30 18:35:24
你可以看下测序图谱，如果图形没问题的话那应该就不会测错了，考虑重新P吧
赞一下(1人) 回复此楼
11楼2011-08-30 15:01:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shaquila

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 确实，我们在他家测序也出过问题 2011-08-30 18:35:50
也有可能是PCR过程出错，金斯瑞测序一般，之前送了几个RNAi载体测序，因为是发卡结构，死活测不出来，换了其它公司一下就搞定～
赞一下(1人) 回复此楼
12楼2011-08-30 15:11:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lixingliang

新虫 (小有名气)
★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-08-31 17:06:53
我在克隆时也遇到此类问题，后来重复试验，发现总是有这几个改变，这就证明试验没有问题，有可能是另外一个转录本。
赞一下(1人) 回复此楼
我不管你看起看不起我，我都是个演员
13楼2011-08-31 14:45:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)
本帖仅楼主可见
14楼2011-08-31 20:25:13
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

匿名

用户注销 (正式写手)
本帖仅楼主可见
15楼2011-08-31 20:25:31
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

wzqno

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-09-01 18:19:24
一般PCR不要超过30个循环，用宝生物的LATaq酶试试？？你送一次测序都是几个样啊？？我一般一次送五个克隆的样品，也有突变的，不过每个都是在不同位置的突变，不过还好，一般都有一个到两个是100% 正确的，如果没有的话，再送几个克隆样品，总会有正确的。不过如果几个样品得到的结果很一致，那就说明样品确实有问题，重新PCR吧。金斯瑞我一直在用，除了慢点，还挺好的，和上海生工，华大测序都是一样的仪器，没问题的
赞一下(2人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

facingworld
16楼2011-09-01 09:31:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)
送鲜花一朵
本帖仅楼主可见
赞一下
17楼2011-09-04 21:06:02
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

wzqno

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励应助！ 2011-12-13 18:55:17
引用回帖:
17楼: Originally posted by facingworld at 2011-09-04 21:06:02:
这几天有点忙，嘿嘿，送小红花一朵吧！这个克隆做的很纠结，我用的是TakaRa的载体和感受态细胞，但是一直长得斑很少，只有十几个，不知道是什么原因，并且阳性克隆就这么一两个，并且测序有问题，究竟是什么地方 ...

你可以自己做感受态啊，我一直都是自己做的，效果不错，如果转化成功的话都能长上几百个克隆，基本上随便挑十个克隆，有阳性的话就送测序，如果没有，基本上就重新做感受态，转化。
        制备感受态方法
1.Top10甘油菌液50ul接种4ml LB液体培养基（无氨苄），300rpm,过夜培养；
2.取过夜培养的Top10 菌液500ul接种 5ml LB液体培养基（无氨苄），300rpm，2h；这时就算是对数期细菌了。
3.取对数期菌液分次放入1.5ml无菌离心管中共计5ml，5500 rpm离心1 min；
4.弃上清，用500ul预冷的0.1M CaCl2重悬细菌沉淀【动作轻柔，可用枪头轻微搅动，吹打动作需轻柔】，至无明显菌块，5500 rpm离心1 min；
5.弃上清，再向细菌沉淀中加入500ul预冷的0.1M CaCl2，混匀，冰浴30min，待用。
6.然后就可以做转化了，一般热激60-70s就可以了
赞一下(1人) 回复此楼
18楼2011-09-05 08:47:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baby0032

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by shaquila at 2011-08-30 15:11:10:
也有可能是PCR过程出错，金斯瑞测序一般，之前送了几个RNAi载体测序，因为是发卡结构，死活测不出来，换了其它公司一下就搞定～

请问楼主测序的是什么公司啊？
赞一下 回复此楼
19楼2011-12-13 16:41:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 facingworld 的主题更新
192/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 2rKfVQg2jQww 2026-11-06 16/800 2026-11-09 06:54 by l48hFd8Nwae2
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 8/400 2026-11-09 00:14 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 8/400 2026-11-08 23:01 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 9/450 2026-11-08 22:46 by l48hFd8Nwae2
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +10 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 22/1100 2026-11-06 17:18 by 5sJFDKp2kwuI
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 7/350 2026-11-06 16:43 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 5/250 2026-11-06 16:43 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 8/400 2026-11-06 16:34 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 14/700 2026-11-06 16:32 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:32 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 15/750 2026-11-06 13:49 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 10/500 2026-11-06 12:32 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 5/250 2026-11-06 09:01 by 2lRNluKrJpwL
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 12/600 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 kvewwGtKktqB 2026-11-04 11/550 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 kvewwGtKktqB 2026-11-04 16/800 2026-11-06 05:00 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:15 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:42 by qL1cU46YIdK0
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 11:10 by PYZmcHr5kSaq
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭