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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 测序后的DNA序列与预测的有几个碱基不同，怎么办
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匿名

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1楼 2011-08-29 20:33:47
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wzqno

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-09-01 18:19:24
一般PCR不要超过30个循环，用宝生物的LATaq酶试试？？你送一次测序都是几个样啊？？我一般一次送五个克隆的样品，也有突变的，不过每个都是在不同位置的突变，不过还好，一般都有一个到两个是100% 正确的，如果没有的话，再送几个克隆样品，总会有正确的。不过如果几个样品得到的结果很一致，那就说明样品确实有问题，重新PCR吧。金斯瑞我一直在用，除了慢点，还挺好的，和上海生工，华大测序都是一样的仪器，没问题的
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facingworld
16楼2011-09-01 09:31:07
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匿名

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2楼2011-08-29 20:44:08
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-08-30 08:03:04
facingworld(金币+2): 好人呀！我也打算在送几个克隆去看看，还想问问，永久军也能不能反复冻融呀！这个如果要测序我要送永久菌液呀！ 2011-08-30 08:55:01
金斯瑞在生物行业已经是一家相当牛的公司了，你看一下测序图，如果每个碱基都测的不错的话那你的序列就是这样子了。给你提供以下方案：
1.多送测几个克隆，如果测的结果跟这次一致，那么没必要重新扩增了。
2.如果必须要得到理想中的序列，那就需要做突变修复。
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
3楼2011-08-29 21:06:09
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叶心飞翔

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-08-30 08:03:24
facingworld(金币+1): 又是一个好人呀！624位有一个T-A的突变 870位有一个A-G的突变，1412位有一个C-T的突变，1950位有个G-T的突变，这些算测序开始的突变吗？ 2011-08-30 09:01:59
测序一般每个反应开始都不准确，首先排除这个因素。同意楼上的同时送几个测序进行比较，用高保真的酶再做一次，修复突变比较麻烦。
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4楼2011-08-29 21:51:12
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