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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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guojianping

木虫 (正式写手)


dhd997(金币+1): 鼓励交流 2011-08-31 11:58:29
6楼的高手正解。另外可以加点DMSO试试吧
11楼2011-08-31 09:59:53
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xhlxhl

木虫 (正式写手)

10×Ex Taq buffer  2 ul,dNTP Mixture 1 ul,菌液1 ul,   即可~~~
12楼2011-08-31 18:46:01
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tuodecai

铁杆木虫 (著名写手)

小丹木木(金币+2): 鼓励交流 2012-02-27 17:40:09
本人做PCR较多,菌液PCR也不少,经常是一次性做一两百个的,而且是P长达11KB的片段,所以觉得做PCR还是有一定的运气,也就是指不稳定性。做菌液PCR最关键的如楼上所言:要做好阳性对照和阳性对照    这样就可以分析是反应体系还是反应条件的问题,而反应体系中最可能出问题的却是模板了,再者就是引物,为排除其它体系问题,对于新手可以用MIX反应液,现在很多公司都有卖,用起来方便,省去加样时出错;而反应条件里面最关键的就是退火温度了,至少菌液PCR,我习惯用较低一点儿的,50-55度,不过可根据自己的引物来定,其实总的来说,菌液PCR是非常容易扩增出来的。若基本排除所有可能的问题,找不到其它原因,可以再P一次,前提是你的阳性和阴性对照都是没问题的时候。第二次还没扩出来,那就是没有阳性克隆。欢迎交流!
13楼2011-09-01 20:42:08
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chitty6361

新虫 (初入文坛)

的确是质粒没有出来啊,把菌液水浴煮沸5min总算P出来了!!!
14楼2012-02-27 16:48:44
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zhangleism2004

金虫 (正式写手)

第一步15分钟改成5分钟
Zhl
15楼2012-04-24 23:22:56
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lanjb1013

新虫 (初入文坛)

是T载体克隆啊,还是其他的载体链接了?
16楼2012-04-25 00:14:59
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