| 查看: 3570 | 回复: 13 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
通用引物扩增细菌16S rDNA
|
||
|
我用通用引物扩增细菌16S rDNA，直接菌落PCR，我试了7、8次，每次都有700bp左右的的非特异性扩增，目的片段也有，在1500bp左右，我老师说他以前一做就出来了，根本没有非特异性扩增，为什么我每次都有呢，请各位虫友帮帮我~~~PCR体系如下（50uL体系）： 10*Buffer 5UL MgCl2（50mM） 2uL 引物a（10uL） 1.5uL 引物b（10uL） 1.5uL dNTP（10mM） 1uL Taq酶（2U/uL） 1uL 模板 枪头蘸取一点菌 ddH2O 38uL ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 94度预变性5min 94度 45s 56度 45s 72度 90s 30个循环 问题到底出在哪里呢？我的退火温度从55-59度都试过，59度就没有条带了，引物从1、1.5、2uL的都试过，预变性时间从5、10、12min都试过，还试过把前一次PCR产物取1uL做模板，都有非特异性条带，为么捏？？？望大虾不吝赐教，小女先谢谢大家了~~ |
回复此楼» 猜你喜欢
本人42，博士刚毕业，现在找不到工作，怎么办？:(
已经有20人回复
-
河北省自然基金
已经有6人回复
-
博士申请
已经有5人回复
-
有人投过CCC中国控制会议吗？
已经有3人回复
-
3,4-二羟基苯乙酮如何纯化？
已经有5人回复
-
国基评审
已经有10人回复
-
2026-博士申请
已经有4人回复
-
考研调剂
已经有3人回复
-
急招9月入学博士，要有4级、最晚7月硕士毕业。精密电机驱控课题；学位材料
已经有5人回复
-
312求调剂
已经有3人回复
12楼2011-08-22 21:57:34
2楼2011-08-19 16:31:23
3楼2011-08-19 22:15:20
wqj1988926
金虫 (正式写手)
- BioEPI: 2
- 应助: 40 (小学生)
- 金币: 1222
- 散金: 27
- 红花: 5
- 帖子: 929
- 在线: 225.6小时
- 虫号: 1156883
- 注册: 2010-11-27
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
4楼2011-08-20 09:00:12