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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蓝白斑筛选
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madengyu

禁虫 (小有名气)
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【分子生物】EPI帖

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1楼 2011-08-18 08:10:34
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lloveyr

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-08-18 11:06:52
我们做实验的时候几乎从来不用蓝白斑筛选，其实只要你载体和片段的比例合适，板上长出来的几乎就都是阳性克隆，挑选几个做下PCR鉴定根据产物大小来确定是否阳性克隆，然后就可以测序了
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5楼2011-08-18 10:38:16
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good！专家辛苦了哦！ 2011-08-18 08:59:59
madengyu(金币+2): 2011-08-18 13:14:34
引用回帖:
1楼: Originally posted by madengyu at 2011-08-18 08:10:34:
进行克隆E.coli的蓝白斑筛选，需在LB固体培养基中加X-Gal、IPTG、Amp。请教各位大侠，我买的X-Gal、IPTG、Amp都是固体粉末，怎么加到LB培养基里呢？麻烦各位有没有一个配方呢？我是直接加固体粉末呢？还是先配成一 ...

IPTG说明书给你一个，自己查！见附件！
将X-Gal溶解于二甲基甲酰胺中，浓度操作的话给你一个说明书，见附件；
Amp也是溶解于去离子水中，浓度为50mg/ml；
直接加固体粉末当然不行了；你将三者配好之后，然后按照说明书中说的添加一定量进培养基就可以了；

当然了平时我们都是先将抗生素加入到LB培养基中，然后倒培养基，等到涂布的时候，分别在板子上涂布X-Gal和IPTG的，这样比较方便一点；至于楼主所说的长出来什么样子，长出来有的单克隆是白色的，有的是蓝色的，自己image一下就可以了，不过有些实验是需要白色的单克隆，有些则是需要蓝色的单克隆的！
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2011-08-18 08:36:15
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anlewo7777

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

http://image.baidu.com/i?ct=5033 ... 9&W690&H498
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4楼2011-08-18 08:42:47
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zt6864594

木虫 (小有名气)
抗性板上能长的基本都是吧，挑几个酶切或PCR鉴定就可以了

而且感觉蓝白斑筛选效果也不怎么样。有时蛮长时间才能显示。还不如直接挑了鉴定
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自是人生长恨水长东
6楼2011-08-18 14:38:41
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