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madengyu

禁虫 (小有名气)

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lloveyr

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-08-18 11:06:52
我们做实验的时候几乎从来不用蓝白斑筛选,其实只要你载体和片段的比例合适,板上长出来的几乎就都是阳性克隆,挑选几个做下PCR鉴定根据产物大小来确定是否阳性克隆,然后就可以测序了
5楼2011-08-18 10:38:16
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good!专家辛苦了哦! 2011-08-18 08:59:59
madengyu(金币+2): 2011-08-18 13:14:34
引用回帖:
1楼: Originally posted by madengyu at 2011-08-18 08:10:34:
进行克隆E.coli的蓝白斑筛选,需在LB固体培养基中加X-Gal、IPTG、Amp。请教各位大侠,我买的X-Gal、IPTG、Amp都是固体粉末,怎么加到LB培养基里呢?麻烦各位有没有一个配方呢?我是直接加固体粉末呢?还是先配成一 ...

IPTG说明书给你一个,自己查!见附件!
将X-Gal溶解于二甲基甲酰胺中,浓度操作的话给你一个说明书,见附件;
Amp也是溶解于去离子水中,浓度为50mg/ml;
直接加固体粉末当然不行了;你将三者配好之后,然后按照说明书中说的添加一定量进培养基就可以了;

当然了平时我们都是先将抗生素加入到LB培养基中,然后倒培养基,等到涂布的时候,分别在板子上涂布X-Gal和IPTG的,这样比较方便一点;至于楼主所说的长出来什么样子,长出来有的单克隆是白色的,有的是蓝色的,自己image一下就可以了,不过有些实验是需要白色的单克隆,有些则是需要蓝色的单克隆的!
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2011-08-18 08:36:15
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anlewo7777

木虫 (正式写手)

4楼2011-08-18 08:42:47
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zt6864594

木虫 (小有名气)

抗性板上能长的基本都是吧,挑几个酶切或PCR鉴定就可以了

而且感觉蓝白斑筛选效果也不怎么样。有时蛮长时间才能显示。还不如直接挑了鉴定
自是人生长恨水长东
6楼2011-08-18 14:38:41
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