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1楼 2011-08-17 15:39:19

已阅关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
rainwander(金币+5, MicEPI+1): 鼓励 2011-09-01 17:33:32

引用回帖:

1楼: Originally posted by erluoshi at 2011-08-17 15:39:19:

大家好，请教思路
毕赤酵母上罐发酵生产细胞外产物，得到了广泛的应用。我用无机培养基上罐发酵，得到的是黄绿色的发酵上清液，经过了分离柱的分离纯化，色素还是存在。
色素成分有谁研究了解没？
...

对于我的淀粉酶来说，第一步如果用疏水层析可以去除绝大部分的色素。

粗酶液经过2M硫酸铵处理4℃静置过夜，8000RPM离心去沉淀，上清液的pH值调节为4.0于4℃静置过夜，8000RPM离心去沉淀，上清液的pH值调节为6.5，依次用0.45μm和0.22μm滤膜过滤，用HiPrep Phenyl cv=20ml进行蛋白质分离（程序为20mM磷酸钠缓冲液、2M硫酸铵、20cv、0-100%B、流速5ml/min）（图1）。

由于样品多达200ml，所以穿透液较多，每管为15ml，而洗脱液为每管5ml。测定各管OD600表示颜色深浅（图3），将淀粉酶所在的收集管（淀粉酶在洗脱液中的分布图2）合并后也测定OD600，结果以原酶液作为100%，则穿透液占51.71%，其它洗脱液占32.14，淀粉酶所在的洗脱液占13.39，可见能去掉绝大部分的色素（图4）。