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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 毕赤酵母发酵上清液——脱色素？？
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erluoshi

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1楼 2011-08-17 15:39:19
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
rainwander(金币+5, MicEPI+1): 鼓励 2011-09-01 17:33:32
引用回帖:
1楼: Originally posted by erluoshi at 2011-08-17 15:39:19:
大家好，请教思路
    毕赤酵母上罐发酵生产细胞外产物，得到了广泛的应用。我用无机培养基上罐发酵，得到的是黄绿色的发酵上清液，经过了分离柱的分离纯化，色素还是存在。
    色素成分有谁研究了解没？
  ...

对于我的淀粉酶来说，第一步如果用疏水层析可以去除绝大部分的色素。

粗酶液经过2M硫酸铵处理4℃静置过夜，8000RPM离心去沉淀，上清液的pH值调节为4.0于4℃静置过夜，8000RPM离心去沉淀，上清液的pH值调节为6.5，依次用0.45μm和0.22μm滤膜过滤，用HiPrep Phenyl cv=20ml进行蛋白质分离（程序为20mM磷酸钠缓冲液、2M硫酸铵、20cv、0-100%B、流速5ml/min）（图1）。

由于样品多达200ml，所以穿透液较多，每管为15ml，而洗脱液为每管5ml。测定各管OD600表示颜色深浅（图3），将淀粉酶所在的收集管（淀粉酶在洗脱液中的分布图2）合并后也测定OD600，结果以原酶液作为100%，则穿透液占51.71%，其它洗脱液占32.14，淀粉酶所在的洗脱液占13.39，可见能去掉绝大部分的色素（图4）。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
19楼2011-09-01 03:38:43
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
活性炭吸附，离心去除活性炭
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2楼2011-08-17 16:12:25
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

活性碳也吸蛋白的吧！！建议你用超滤的方法吧，可以同时置换缓冲液和浓缩
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3楼2011-08-17 22:46:40
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
3楼: Originally posted by ganchao1776 at 2011-08-17 22:46:40:
活性碳也吸蛋白的吧！！建议你用超滤的方法吧，可以同时置换缓冲液和浓缩

活性炭确实也吸附蛋白质的，但很多方法都会造成蛋白质的损失，另外，楼主说的是“细胞外产物”，不知道是蛋白质还是什么东西，要是分子量比较小，你的超滤就不起作用了。
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4楼2011-08-18 00:15:50
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