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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » WB检测磷酸化蛋白
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geek23

木虫 (小有名气)

[求助] WB检测磷酸化蛋白

各位大侠,有用过CST的磷酸化抗体检测磷酸化蛋白的吗?请问在整个提蛋白以及WB过程中有什么注意事项?小女最近做了几个抗体都没有条带.急~~~
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Bethechangeyouwishtosee.
1楼 2011-08-15 10:23:24
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geek23

木虫 (小有名气)
silicare(金币+3): 谢谢参与 2012-02-20 12:46:03
引用回帖:
28楼: Originally posted by zplipeng at 2011-12-26 23:10:14:
您好！我现在已经把Erk1/2和p38的磷酸化做出来了。但奇怪的是未经过任何处理的阴性对照细胞也有磷酸化的激活，不知道是怎么回事啊。楼主遇到过这种问题吗？

不知道和你的阴性对照比起来,是不是实验组的磷酸化程度更明显呢?一般我们用药物处理后,部分阴性对照组也会有磷酸化出现,细胞本底表达部分磷酸化激酶很常见.出现这种情况时你再去查一下文献,看看是不是该细胞本底就有该磷酸化蛋白的表达,.如果别人没有,估计就要从你的细胞状态入手了,最好是等到细胞长到对数生长期再处理.之前看一篇文献说,如果要加入药物处理,最好先将细胞用无血清培养基培养24h使细胞同步化,估计这样会使细胞间的误差减小吧,不过我还没试过,呵呵~~~
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Bethechangeyouwishtosee.
29楼2011-12-27 09:20:05
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AZURESKY1999

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

也想做此类相关的课题，但并不是太懂，友情帮顶
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2楼2011-08-15 16:26:06
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qingyuansw20

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
adslye(金币+1): 鼓励交流~祝顺利！ 2011-08-15 17:49:33
geek23(金币+5): 请问楼上.我主要是做药物处理后一些蛋白的表达,我一般是加药后48H提蛋白.你的意思是说缩短时间间隔吗?谢谢你的回答. 2011-08-16 16:49:42
CST的抗体应该不错，但不知你的是单克隆还是多克隆，没有条带，是不是磷酸化没有形成。磷酸化有时形成的时间比较短，做实验时要严格对待。
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3楼2011-08-15 16:48:37
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geek23

木虫 (小有名气)
请问楼上.我主要是做药物处理后一些蛋白的表达,我一般是加药后48H提蛋白.你的意思是说缩短时间间隔吗?谢谢你的回答.
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Bethechangeyouwishtosee.
4楼2011-08-16 16:49:04
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