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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » WB检测磷酸化蛋白
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geek23

木虫 (小有名气)

[求助] WB检测磷酸化蛋白

各位大侠,有用过CST的磷酸化抗体检测磷酸化蛋白的吗?请问在整个提蛋白以及WB过程中有什么注意事项?小女最近做了几个抗体都没有条带.急~~~
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Bethechangeyouwishtosee.
1楼 2011-08-15 10:23:24
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noah1020

新虫 (小有名气)
★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-08-19 18:12:27
引用回帖:
12楼: Originally posted by geek23 at 2011-08-19 15:03:42:
谢谢你的经验分享. 我主要做肝癌细胞. 而且检测过很多种磷酸化蛋白.前几次有检测出表达变化,比如p-cdc25c, p-cjun.用的是RIPA法裂解蛋白, PI 用的是罗氏的,加了磷酸酶抑制剂的.估计这几次的实验结果还是和蛋白的 ...

我的上样量大，因为我用的是原代细胞~大概一个泳道上60ug的蛋白~按理说肝癌细胞比较皮实的，一般情况下癌症细胞内的蛋白会比较给力，也不那么脆弱~你再试试~
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13楼2011-08-19 15:13:41
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AZURESKY1999

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

也想做此类相关的课题，但并不是太懂，友情帮顶
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2楼2011-08-15 16:26:06
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qingyuansw20

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
adslye(金币+1): 鼓励交流~祝顺利！ 2011-08-15 17:49:33
geek23(金币+5): 请问楼上.我主要是做药物处理后一些蛋白的表达,我一般是加药后48H提蛋白.你的意思是说缩短时间间隔吗?谢谢你的回答. 2011-08-16 16:49:42
CST的抗体应该不错，但不知你的是单克隆还是多克隆，没有条带，是不是磷酸化没有形成。磷酸化有时形成的时间比较短，做实验时要严格对待。
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3楼2011-08-15 16:48:37
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geek23

木虫 (小有名气)
请问楼上.我主要是做药物处理后一些蛋白的表达,我一般是加药后48H提蛋白.你的意思是说缩短时间间隔吗?谢谢你的回答.
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Bethechangeyouwishtosee.
4楼2011-08-16 16:49:04
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