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geek23

木虫 (小有名气)

[求助] WB检测磷酸化蛋白

各位大侠,有用过CST的磷酸化抗体检测磷酸化蛋白的吗?请问在整个提蛋白以及WB过程中有什么注意事项?小女最近做了几个抗体都没有条带.急~~~
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Bethechangeyouwishtosee.
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geek23

木虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by noah1020 at 2011-08-19 14:58:17:
我用CST抗体做过p-erk~很好用的抗体~我用的药物刺激后peak出现在5min~你要真给药48h估计悬了...还是缩短暴露时间试试吧~还有就是,抗体可以在-20存,蛋白必须在-80,尤其是磷酸化的!在转膜的时候在转膜槽外面加一 ...

谢谢你的经验分享. 我主要做肝癌细胞. 而且检测过很多种磷酸化蛋白.前几次有检测出表达变化,比如p-cdc25c, p-cjun.用的是RIPA法裂解蛋白, PI 用的是罗氏的,加了磷酸酶抑制剂的.估计这几次的实验结果还是和蛋白的质量有关. 我还想问问你. 磷酸化蛋白检测,你一般上样量多少啊?
Bethechangeyouwishtosee.
12楼2011-08-19 15:03:42
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AZURESKY1999

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

也想做此类相关的课题,但并不是太懂,友情帮顶
2楼2011-08-15 16:26:06
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qingyuansw20

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


adslye(金币+1): 鼓励交流~祝顺利! 2011-08-15 17:49:33
geek23(金币+5): 请问楼上.我主要是做药物处理后一些蛋白的表达,我一般是加药后48H提蛋白.你的意思是说缩短时间间隔吗?谢谢你的回答. 2011-08-16 16:49:42
CST的抗体应该不错,但不知你的是单克隆还是多克隆,没有条带,是不是磷酸化没有形成。磷酸化有时形成的时间比较短,做实验时要严格对待。
3楼2011-08-15 16:48:37
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geek23

木虫 (小有名气)

请问楼上.我主要是做药物处理后一些蛋白的表达,我一般是加药后48H提蛋白.你的意思是说缩短时间间隔吗?谢谢你的回答.
Bethechangeyouwishtosee.
4楼2011-08-16 16:49:04
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