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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » westen blot 染色
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空蓝Y劫

新虫 (小有名气)

[求助] westen blot 染色

最近做western blot 实验结果总是不理想，不出条带。开始时以为是转膜的问题，但染色后的膜在放置一晚上后，染色液蒸发掉了，这个时候在膜上竟然出现条带了！！，

这是怎么个情况呢？？

染色液不知道是什么东西，见上面有 amresco 字样，

膜的话上有Hybond字样，使用前100%甲醇浸泡10s.
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1楼2011-08-12 08:39:28
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qingyuansw20

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
看天(金币+3): 鼓励回答 2011-08-13 23:38:45
1、根据彩色marker判断跑电泳时是否跑开。marker开了，蛋白自然跑开。
2、转膜要根据PVDF膜上是否有marker条带判断，有就是转上去了。如果转过，会被转到滤纸上。转的不彻底会在胶上游残留。
3、染色是染胶。丽春红染色几个小时，看看就知道了。有带就说明你的蛋白没问题。
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9楼2011-08-13 17:30:42
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w2boluo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 感谢交流~祝顺利！ 2011-08-12 09:43:49
典型的PVDF膜，这种膜的结合能力较强，杂交背景一般比较深。你用的半干法还是湿法转膜？有没使用预染marker？后者就是阳性对照，一般会标示为prestained
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How about the future？
2楼2011-08-12 09:34:20
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空蓝Y劫

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by w2boluo at 2011-08-12 09:34:20:
典型的PVDF膜，这种膜的结合能力较强，杂交背景一般比较深。你用的半干法还是湿法转膜？有没使用预染marker？后者就是阳性对照，一般会标示为prestained

用的是预染Marker啊，就是跑完SDS-PAGE后不用染色直接就能看到的Marker吧，
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3楼2011-08-12 10:50:34
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空蓝Y劫

新虫 (小有名气)
★ ★
adslye(金币+2): 鼓励新虫交流~祝顺利！ 2011-08-14 09:38:22
应该是湿转，因为用到那个三明治，一黑板，一海绵，一滤纸，一PVDF膜，然后滤纸，海绵，板，这样的，
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4楼2011-08-12 10:52:12
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