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416114799

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by 韩俊 at 2011-08-14 13:38:45:
求教两个问题
1.那怎么样防止这个不均匀呢？
2.经常倒分离胶的时候会在小烧杯里剩下一点，但是往往板里的已经凝结了，不过小烧杯里的还是不凝结，这是为什么？

如果你的胶凝得很快，说明你的催化剂还是没有失效的，也有可能你加了太多，加了太多也会导致胶太硬，跑时往往容易烧胶，板里的分部比较均匀，凝得快是自然的（比较平，散得比较开）。这个与你的胶不均匀无关。
很多实验室的DNA胶都是回收利用的，用久了自然杂质也多，不知道你们是是否这样，如果不是的话，你可以摇匀点，加的时候快点，也尽量让胶出于一个水平面，高低不同的话，浓度自然不同，就不均匀了。
我觉得你花几天去摸索一下吧，把认为比较可能的原因做个实验。磨刀不误砍柴工啊
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做人做事要低调,默默践行心中的梦想.
11楼2011-08-14 19:37:43
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416114799

至尊木虫 (知名作家)
不好意思，另一个人是DNA电泳胶，我也回答了，搞错了，重新说明一下。
还是那个意思，你先做个不液封的试试，看看是否有稀释的可能。
至于如何做到均匀，这个得靠自己的经验去摸索，别人说的其实都只是理论而已，与实际还是有差距的。
①、如果是用bio-rad，一般卡板比较好解决问题，这个卡板过程一般不导致不均匀；但是如果是国产的，比如六一牌电泳仪，那卡板就很关键了，卡不紧会漏胶，太紧了就会导致两边的胶比中间的薄，自然就不均匀了，所以这个比较难办；
②、尽量在温度高一些时凝胶，温度太低，凝得就慢，分子运动自然会导致不均匀；
③、保证药品的有效性，特别是APS，包括国药牌的，其实质量都一样，最好按量分装，比如10%的APS，你可以称0.5g或1gAPS分装于小离心管中，要用时随时配，一定要干燥保存；
只要克服了以上问题，一般是可以解决的
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12楼2011-08-14 19:53:56
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416114799

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

我自己在做的时候就发现，胶不均匀影响非常大的，另外，跑时不要把电压调太低或太高，太低了无法分离，太高了容易烧胶。往往是先调低一些，比如120V，10min，让条带聚在一起，然后调到150V，这样出来的条带就非常细，非常漂亮。电压不稳定容易导致拖带，甚至笑脸等
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13楼2011-08-14 19:59:41
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danyzj01

银虫 (正式写手)
引用回帖:
1247295楼: Originally posted by 韩俊 at 2011-08-14 13:38:45:
求教两个问题
1.那怎么样防止这个不均匀呢？
2.经常倒分离胶的时候会在小烧杯里剩下一点，但是往往板里的已经凝结了，不过小烧杯里的还是不凝结，这是为什么？

1、倒之前混匀一般就可以了吧
2、那是因为有空气的原因，烧杯里的受外界空气影响聚合慢
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14楼2012-03-29 21:35:07
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