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416114799

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by 韩俊 at 2011-08-14 13:38:45:
求教两个问题
1.那怎么样防止这个不均匀呢?
2.经常倒分离胶的时候会在小烧杯里剩下一点,但是往往板里的已经凝结了,不过小烧杯里的还是不凝结,这是为什么?

如果你的胶凝得很快,说明你的催化剂还是没有失效的,也有可能你加了太多,加了太多也会导致胶太硬,跑时往往容易烧胶,板里的分部比较均匀,凝得快是自然的(比较平,散得比较开)。这个与你的胶不均匀无关。
很多实验室的DNA胶都是回收利用的,用久了自然杂质也多,不知道你们是是否这样,如果不是的话,你可以摇匀点,加的时候快点,也尽量让胶出于一个水平面,高低不同的话,浓度自然不同,就不均匀了。
我觉得你花几天去摸索一下吧,把认为比较可能的原因做个实验。磨刀不误砍柴工啊
做人做事要低调,默默践行心中的梦想.
11楼2011-08-14 19:37:43
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416114799

至尊木虫 (知名作家)

不好意思,另一个人是DNA电泳胶,我也回答了,搞错了,重新说明一下。
还是那个意思,你先做个不液封的试试,看看是否有稀释的可能。
至于如何做到均匀,这个得靠自己的经验去摸索,别人说的其实都只是理论而已,与实际还是有差距的。
①、如果是用bio-rad,一般卡板比较好解决问题,这个卡板过程一般不导致不均匀;但是如果是国产的,比如六一牌电泳仪,那卡板就很关键了,卡不紧会漏胶,太紧了就会导致两边的胶比中间的薄,自然就不均匀了,所以这个比较难办;
②、尽量在温度高一些时凝胶,温度太低,凝得就慢,分子运动自然会导致不均匀;
③、保证药品的有效性,特别是APS,包括国药牌的,其实质量都一样,最好按量分装,比如10%的APS,你可以称0.5g或1gAPS分装于小离心管中,要用时随时配,一定要干燥保存;
只要克服了以上问题,一般是可以解决的
做人做事要低调,默默践行心中的梦想.
12楼2011-08-14 19:53:56
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416114799

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

我自己在做的时候就发现,胶不均匀影响非常大的,另外,跑时不要把电压调太低或太高,太低了无法分离,太高了容易烧胶。往往是先调低一些,比如120V,10min,让条带聚在一起,然后调到150V,这样出来的条带就非常细,非常漂亮。电压不稳定容易导致拖带,甚至笑脸等
做人做事要低调,默默践行心中的梦想.
13楼2011-08-14 19:59:41
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danyzj01

银虫 (正式写手)

引用回帖:
1247295楼: Originally posted by 韩俊 at 2011-08-14 13:38:45:
求教两个问题
1.那怎么样防止这个不均匀呢?
2.经常倒分离胶的时候会在小烧杯里剩下一点,但是往往板里的已经凝结了,不过小烧杯里的还是不凝结,这是为什么?

1、倒之前混匀一般就可以了吧
2、那是因为有空气的原因,烧杯里的受外界空气影响聚合慢
14楼2012-03-29 21:35:07
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