| 查看: 2795 | 回复: 19 | |||
| 本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
friya0910新虫 (正式写手)
|
[求助]
连接体系的确定
|
||
这是我酶切载体和目的基因以后切胶回收的电泳图，左边为载体，右边为目的片段，上样量均为2微升，有没有高手帮我看看我的连接体系中载体和目的片段怎么定量啊？我用的是宝生物的T4连接酶，25微升的体系加1微升的酶和2.5微升的buffer。还有一个问题是连接之后的连接液可以直接做转化么？我看说明书上说还要加醋酸钠，无水乙醇沉淀等！ |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有95人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
peace12039088
银虫 (小有名气)
- MolEPI: 1
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 417.7
- 散金: 300
- 红花: 1
- 帖子: 263
- 在线: 79小时
- 虫号: 613016
- 注册: 2008-09-26
- 专业: 生物大分子结构与功能
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, MolEPI+1): 做多了就可以凭经验来判断了 2011-08-12 17:58:39
西瓜(金币+5, MolEPI+1): 做多了就可以凭经验来判断了 2011-08-12 17:58:39
|
楼主做实验很小心谨慎啊，不过事实上做实验是应该如此的。 连接体系你可以按照说明书减半使用或者按比例做成10ul的体系均可，之前我一直使用TaKaRa的连接酶，都是用10ul的连接体系，而且实验室的人都是用10ul的体系。这样的体系不会影响最后的连接效果的。连接产物可以用2-10ul均可，最初我用的少，后来就全部转啦，因为如果出问题，都会重新开始，而不会再用已有的连接液。还有就是感受态也是用50ul左右，很少用100ul的。总之，就是将说明书提供的标准体系都减半（或一半多）使用了。 关于连接中的载体与目标片段的问题。首先没有完全必要按照公式来套，因为回收后的载体及目标片段一般是很难绝对定量的，所以一般人应该都是根据回收后的亮度来作为加入的依据的。但需要注意的一点是，同样亮度的不同大小的片段，大片段的浓度要高于小片段的，所以有了这个前提，就可以凭感觉来加入了，这样讲可能看起来很不敬业的，但事实上就是这样的，你自己尝试几次就可完全领会了。 啰嗦了很多，希望可以对你有用。尽量相信自己，很多人刚开始接触实验，都会有与你类似的疑问和心情。 |
18楼2011-08-12 10:51:06
friya0910
新虫 (正式写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 19.4
- 散金: 360
- 帖子: 401
- 在线: 77.4小时
- 虫号: 1073675
- 注册: 2010-08-12
- 专业: 作物分子育种
2楼2011-08-11 20:36:48
blackrose8089
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 16
- 应助: 100 (初中生)
- 贵宾: 0.11
- 金币: 10636.6
- 散金: 155
- 红花: 30
- 沙发: 6
- 帖子: 3702
- 在线: 790.1小时
- 虫号: 614948
- 注册: 2008-09-28
- 专业: 植物学研究的新技术、新方
3楼2011-08-11 20:57:06
friya0910
新虫 (正式写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 19.4
- 散金: 360
- 帖子: 401
- 在线: 77.4小时
- 虫号: 1073675
- 注册: 2010-08-12
- 专业: 作物分子育种
4楼2011-08-11 21:34:34