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sai00fuji

金虫 (正式写手)

[求助] 关于糖原、乙酸钠、乙醇沉淀核酸的问题

用糖原,乙酸钠,乙醇,沉淀DNA。

在含有DNA的溶液里加入以下试剂:

1//10 VOL 乙酸钠

2.5 VOL 95乙醇

1.3 ul 糖原

结果立即出现白色絮状沉淀。我是先加乙醇,再加糖原,最后加乙酸钠。在加入糖原之后,就出现了白色沉淀。

google了一下,糖原不溶于乙醇,是核酸助沉剂。但是以前做的时候貌似没出现这个情况啊,难道是因为以前做的时候是最后加的乙醇?



到底正不正常啊?

谢谢大家~
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adslye

银虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by sai00fuji at 2011-08-12 14:45:26:
我提取rna的时候样品里有多糖,就是用的1/2异丙醇+1/2高盐溶液做的rna沉降,效果还行,条带挺锐利的。当时室温放置10min没有沉淀,我就放-20了,结果溶液有一部分估计是盐溶液就结冰了,有机相还是溶液状态,所以 ...

恩,非常感谢!
5楼2011-08-13 09:05:57
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sai00fuji

金虫 (正式写手)

★ ★
adslye(金币+2): 感谢你的经验,常发帖哦~~祝顺利! 2011-08-12 09:46:37
美国那边的客服说是因为加样顺序,应该先把乙酸钠和糖原什么混匀再加乙醇就ok了,经验之谈
2楼2011-08-12 09:14:59
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adslye

银虫 (正式写手)

这个问题我也想知道,只不过我的是多糖,不想要它。
但我发现高盐除多糖,似乎也存在这个现象。多糖析出后再溶解很困难。
想深入的了解下。
3楼2011-08-12 09:45:58
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sai00fuji

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by adslye at 2011-08-12 09:45:58:
这个问题我也想知道,只不过我的是多糖,不想要它。
但我发现高盐除多糖,似乎也存在这个现象。多糖析出后再溶解很困难。
想深入的了解下。

我提取rna的时候样品里有多糖,就是用的1/2异丙醇+1/2高盐溶液做的rna沉降,效果还行,条带挺锐利的。当时室温放置10min没有沉淀,我就放-20了,结果溶液有一部分估计是盐溶液就结冰了,有机相还是溶液状态,所以可能还是放在冰水浴里比较好吧,那次结果还行就没有继续试。

美国那边说的是因为乙酸钠和糖原要先结合,如果先加乙醇的话,糖原就直接析出了。所以你试试先加盐再加糖原再加乙醇的方法吧。
4楼2011-08-12 14:45:26
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