24小时热门版块排行榜    

查看: 2883  |  回复: 13
本帖产生 1 个 MicEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

dehong1573

至尊木虫 (正式写手)

[求助] 黄单胞菌总DNA提取

我用SDS裂解法提取黄单胞菌的总DNA,在加NaCl离心后,粘乎乎的很难吸取上清。各位虫友有什么好 的解决办法?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

科学永无止境,只有合作共享才能更好地……
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Virginiaの

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dehong1573(金币+3): 非常感谢,我用的是SDS裂解法,就是用2%SDS 55度裂解半小时,再加5M的NaCl离心取上清,然后用乙醇沉淀。 2011-08-14 08:40:46
rainwander(金币+5, MicEPI+1): 鼓励交流 2011-08-14 10:08:29
dehong1573(金币+5): 2011-08-16 17:14:36
1.如楼上所述,减少细菌量;如果要求的纯度不是很高的话,可以不用考虑那么多。
2.既然做实验嘛,个人觉得还是认真一些比较好,之前我也提了很多次,也有跟楼主同样的现象,我的做法是:用量程较小的移液枪来吸上层,比如10μl、200μl的移液枪,再把枪头稍微减去一点。总之能减少吸力的方法就好。
3、换用另一种提细菌总DNA的方法,不知道楼主采用的是什么方法,我后来利用的是范秀荣编写的《微生物学实验》,方法还是比较传统的,但经过几种方法比较,他的效果还算挺好的,可以利用多种方法试试看。
闲看庭前花开花落,漫随天外云卷云舒。
7楼2011-08-13 22:34:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

tuobaohua

荣誉版主 (文坛精英)

投资理财发言人

优秀版主

没用氯仿/异戊醇?
2楼2011-08-11 12:35:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

D_sheldon

银虫 (小有名气)

引用回帖:
1楼: Originally posted by dehong1573 at 2011-08-11 11:08:47:
我用SDS裂解法提取黄单胞菌的总DNA,在加NaCl离心后,粘乎乎的很难吸取上清。各位虫友有什么好 的解决办法?

12,000rpm离心十分钟是么?我印象中也没有那么难吸吧,吸的时候小心点。不要急,慢慢吸就是了
如果要让我活让我骄傲的活
3楼2011-08-11 12:47:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dehong1573

至尊木虫 (正式写手)

引用回帖:
1楼: Originally posted by dehong1573 at 2011-08-11 11:08:47:
我用SDS裂解法提取黄单胞菌的总DNA,在加NaCl离心后,粘乎乎的很难吸取上清。各位虫友有什么好 的解决办法?

加5M的NaCl后12000离了12min吸取上清,再假酚氯仿抽提。但是上清很难吸取,非常粘,总会把下面的沉淀粘上来.
科学永无止境,只有合作共享才能更好地……
4楼2011-08-11 14:42:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +6 启萌科技 2026-08-12 21/1050 2026-08-14 19:48 by 启萌科技
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +5 Ldrop2023 2026-08-13 5/250 2026-08-14 18:48 by ssxclkj
[基金申请] 好奇怪的filecode +6 布布和一二 2026-08-08 7/350 2026-08-14 13:38 by Equinoxhua
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +5 工厂打螺丝 2026-08-08 5/250 2026-08-14 11:03 by 玖戈弋
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 12/600 2026-08-13 23:20 by iwuli
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
信息提示
请填处理意见