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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 黄单胞菌总DNA提取
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dehong1573

至尊木虫 (正式写手)

[求助] 黄单胞菌总DNA提取

我用SDS裂解法提取黄单胞菌的总DNA，在加NaCl离心后，粘乎乎的很难吸取上清。各位虫友有什么好 的解决办法？
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科学永无止境,只有合作共享才能更好地……
1楼2011-08-11 11:08:47
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tuobaohua

荣誉版主 (文坛精英)

投资理财发言人

优秀版主
没用氯仿/异戊醇？
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2楼2011-08-11 12:35:08
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D_sheldon

银虫 (小有名气)
引用回帖:
1楼: Originally posted by dehong1573 at 2011-08-11 11:08:47:
我用SDS裂解法提取黄单胞菌的总DNA，在加NaCl离心后，粘乎乎的很难吸取上清。各位虫友有什么好 的解决办法？

12,000rpm离心十分钟是么？我印象中也没有那么难吸吧，吸的时候小心点。不要急，慢慢吸就是了
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如果要让我活让我骄傲的活
3楼2011-08-11 12:47:44
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dehong1573

至尊木虫 (正式写手)
引用回帖:
1楼: Originally posted by dehong1573 at 2011-08-11 11:08:47:
我用SDS裂解法提取黄单胞菌的总DNA，在加NaCl离心后，粘乎乎的很难吸取上清。各位虫友有什么好 的解决办法？

加5M的NaCl后12000离了12min吸取上清，再假酚氯仿抽提。但是上清很难吸取，非常粘，总会把下面的沉淀粘上来.
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科学永无止境,只有合作共享才能更好地……
4楼2011-08-11 14:42:38
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dehong1573

至尊木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by tuobaohua at 2011-08-11 12:35:08:
没用氯仿/异戊醇？

我离了12min，上清总是粘住下面的沉淀
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科学永无止境,只有合作共享才能更好地……
5楼2011-08-11 14:44:01
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老夏853

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dehong1573(金币+2): 非常感谢 2011-08-14 08:33:22
rainwander(金币+2): 鼓励交流 2011-08-14 10:08:20
引用回帖:
1楼: Originally posted by dehong1573 at 2011-08-11 11:08:47:
我用SDS裂解法提取黄单胞菌的总DNA，在加NaCl离心后，粘乎乎的很难吸取上清。各位虫友有什么好 的解决办法？

1减少细菌量
2可以将上清连同那粘糊糊的都吸上来，再离心一次 取上清加酚去蛋白
3 如果后续实验对DNA 要求纯度不高的话 就马马虎虎往下做，如对后续没影响，存在也无所谓。
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6楼2011-08-13 19:18:33
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Virginiaの

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dehong1573(金币+3): 非常感谢，我用的是SDS裂解法，就是用2%SDS 55度裂解半小时，再加5M的NaCl离心取上清，然后用乙醇沉淀。 2011-08-14 08:40:46
rainwander(金币+5, MicEPI+1): 鼓励交流 2011-08-14 10:08:29
dehong1573(金币+5): 2011-08-16 17:14:36
1.如楼上所述，减少细菌量；如果要求的纯度不是很高的话，可以不用考虑那么多。
2.既然做实验嘛，个人觉得还是认真一些比较好，之前我也提了很多次，也有跟楼主同样的现象，我的做法是：用量程较小的移液枪来吸上层，比如10μl、200μl的移液枪，再把枪头稍微减去一点。总之能减少吸力的方法就好。
3、换用另一种提细菌总DNA的方法，不知道楼主采用的是什么方法，我后来利用的是范秀荣编写的《微生物学实验》，方法还是比较传统的，但经过几种方法比较，他的效果还算挺好的，可以利用多种方法试试看。
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闲看庭前花开花落，漫随天外云卷云舒。
7楼2011-08-13 22:34:29
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zj2008wx

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by tuobaohua at 2011-08-11 12:35:08
没用氯仿/异戊醇？

麻烦问一下，你对黄单胞菌DY44有研究吗？
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记得对自己微笑！
8楼2013-12-25 17:01:05
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zj2008wx

木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by D_sheldon at 2011-08-11 12:47:44
12,000rpm离心十分钟是么？我印象中也没有那么难吸吧，吸的时候小心点。不要急，慢慢吸就是了...

麻烦问一下，你对黄单胞菌DY44有研究吗？
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记得对自己微笑！
9楼2013-12-25 17:01:16
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zj2008wx

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by dehong1573 at 2011-08-11 14:42:38
加5M的NaCl后12000离了12min吸取上清，再假酚氯仿抽提。但是上清很难吸取，非常粘，总会把下面的沉淀粘上来....

麻烦问一下，你对黄单胞菌DY44有研究吗？
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记得对自己微笑！
10楼2013-12-25 17:01:26
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