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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 菜鸟问题：细胞保存在液氮罐液相还是气相中？
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wbn

银虫 (小有名气)

[求助] 菜鸟问题：细胞保存在液氮罐液相还是气相中？

我们实验室刚开始做培养细胞的实验。我们以前都是保存在-76度的冰箱里面，这样可行吗？现在我们买了一个Thermo 的CY50900液氮罐，在说明书中是这样说的：
Storing Samples in Vapor
Phase
1. Remove the 2 bottom-most cryoboxes from each
rack.
2. Measure the height of 2 cryoboxes stacked on top of
each other.
3. Fill vessel with liquid nitrogen to the height obtained
from step 2 using a yardstick to measure liquid level
in vessel.
4. Place racks into vessel without the 2 bottom-most
cryoboxes.
— Samples are now above the liquid nitrogen and are
stored in the vapor phase.—
Important—A level monitor should always be used when
you store your samples in the vapor phase because of
the already low levels of liquid nitrogen. Please refer to
page 10 for the correct level monitor for your system.
也就是说细胞要储存在气态中，但是我看网上说的培养技术细胞都是冻存在液相里的。那么到底应该把细胞放在哪里呢？
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1楼 2011-08-05 15:28:25
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hgq115

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
wbn(金币+15): 嗯，我刚给Thermo的客服打电话，他们也说要在液相中，不能理说明书。。 2011-08-05 16:50:00
adslye(金币+2): 鼓励交流~祝顺利！ 2011-08-05 19:34:59
液相，我们保存在液氮罐的细胞都是要用液氮覆没的
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2楼2011-08-05 15:32:18
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l-c-l

金虫 (正式写手)
★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流~祝顺利！ 2011-08-05 19:35:12
细胞冻存，冻存程序是逐渐缓慢降温，例如从-80℃移至液氮，一般密封好的细胞冻存管可以直接浸入液氮中，有些国外的书籍上不鼓励这样做，是因为怕冻存管炸裂，尤其是在组织冻存时。一般使用进口冻存管不会发生这种情况。若是不放心，可先将-80℃移出的冻存管悬挂至液氮面以上数小时，然后在转移至冻存方格中，浸入液氮即可。
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3楼2011-08-05 16:59:26
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zhongyun8668

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★
adslye(金币+3): 鼓励交流！祝顺利！ 2011-08-05 19:35:27
对于保存细胞我们以前是分三种方式进行的，一种保存在液氮中，直接浸入液相里面，可以保存几年之久；一种保存在-80度，用个一年两年的；另外对于近期就会用到的会置于-20度。
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花开花落自有时
4楼2011-08-05 17:08:08
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tony0628

木虫 (小有名气)

阿郎哥
★
silicare(金币+1): 最后一句很好 2011-08-19 08:07:00
任何一种保存方式，只有自己试了才知道。每管细胞多存点，直接放负八十度，或者液氮罐都行的。不要迷信于教科书上的步骤！
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法是万年宝，人是百年囊。人去法犹在，代代护朝纲！
5楼2011-08-18 23:31:28
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Chlo_Q

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
silicare: 金币+5, BioEPI+1, 应助指数+1, 谢谢分享 2012-05-02 13:09:27
细胞冻存，一般是缓慢降温；复苏时则是快速解冻，这样养出来的细胞状态才好
缓慢降温，我们一般放到冻存管后，先放4度一两小时，再在-20一两小时，再转到-40（或直接置-70）放置数小时后就可以直接置液氮里了。
一个博士师姐曾分享的方法则是，先降至-20度后，悬在液氮罐用蒸气降温，慢慢放低，最后再泡进去。不过比较讲技术，因为有一次她降太快了，直接碰到液氮，后来那管细胞复苏后状态就差很多
还有冻存液的用量也可以自己摸索，不一定再用那么多的，毕竟那东西对细胞也是有伤害的。复苏后也要尽快除去它
一点点经验分享，我现在转行了，能分享的也不多，只是一些印象深刻的东西了
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你的理想是什么？你能为你的理想做什么？为了你的理想你能放弃什么？
6楼2012-05-02 12:56:57
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