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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流~祝顺利! 2011-08-05 19:28:54
40nt又不大,直接按照引物合成吧,利用两个引物退火形成带粘端小片段,然后和载体连接
漫洒英雄泪,相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行?一任俺芒鞋破钵随缘化!
11楼2011-08-05 17:11:12
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decloud

木虫 (著名写手)

引用回帖:
967041楼: Originally posted by shaquila at 2011-08-04 20:28:23:
技术路线很简单,引物回来稀释成100pmol/ul
两条各取2ul混匀成4ul,95度变性5min,慢退火(PCR 95度反应后直接停止关机,30分钟后拿出来放在室温)

连接体系就是4ul小片段+载体(能达到300ng最好)+T4buff ...

我也有个问题::::举手~~~~~~

我要导入的也是40bp,但是我要导入的那种含外援基因的的质粒的3端只有一个酶切为点...我准备设计互补含粘性末端的双链...但是一个位点,我没法确定方向啊....
适则存乙,劳则忙乙,
12楼2012-03-25 04:26:28
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shaquila

金虫 (正式写手)

不要确定方向啊,做完后用PCR或测序可以鉴定50%几率~~~
13楼2012-03-25 12:15:30
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