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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 一个合成的约40bp的片段怎么引入载体？
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流~祝顺利！ 2011-08-05 19:28:54
40nt又不大，直接按照引物合成吧，利用两个引物退火形成带粘端小片段，然后和载体连接
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漫洒英雄泪，相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行？一任俺芒鞋破钵随缘化！
11楼2011-08-05 17:11:12
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decloud

木虫 (著名写手)
引用回帖:
967041楼: Originally posted by shaquila at 2011-08-04 20:28:23:
技术路线很简单，引物回来稀释成100pmol/ul
两条各取2ul混匀成4ul，95度变性5min，慢退火（PCR 95度反应后直接停止关机，30分钟后拿出来放在室温）

连接体系就是4ul小片段＋载体（能达到300ng最好）＋T4buff ...

我也有个问题::::举手~~~~~~

我要导入的也是40bp,但是我要导入的那种含外援基因的的质粒的3端只有一个酶切为点...我准备设计互补含粘性末端的双链...但是一个位点,我没法确定方向啊....
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适则存乙，劳则忙乙，
12楼2012-03-25 04:26:28
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shaquila

金虫 (正式写手)
不要确定方向啊，做完后用PCR或测序可以鉴定50%几率～～～
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13楼2012-03-25 12:15:30
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