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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 直接ELISA颜色很浅
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annayy

银虫 (初入文坛)

[求助] 直接ELISA颜色很浅

各位前辈们，本人最近做直接ELISA
前面做过两次，背景很高，读数读不出来
抗体用的santa cruz的抗his-tag的HRP标记的单抗
稀释浓度为500倍
后来调整为1000倍
颜色就很浅了
和阴性对照比，看不出明显差别
抗体浓度重新调整为500倍稀释
颜色依然很浅
其他条件不变
用5%脱脂奶粉封闭的
显色剂买得现成的试剂盒，之前用过，没有问题的
有没有做过此类实验有经验的前辈们指导指导
我实在是迷茫了。。。
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1楼2011-08-03 21:38:31
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violet-88

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
adslye(金币+3): 鼓励新虫交流~祝顺利！ 2011-08-04 11:21:37
1.同样的实验方法（稀释500倍）相反实验结果，考虑是不是抗体有问题。试验中应设置阳性和阴性对照。这样可以很好判断是哪里的问题。
2.包被量、抗体浓度做正交实验可找到其合适的范围。
希望能帮助到你。
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3楼2011-08-04 09:44:08
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yaojc

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
adslye(金币+4): 鼓励交流分享~祝顺利！ 2011-08-04 08:42:56
annayy(金币+1): 2011-08-05 10:18:13
1、抗体及酶标记物的使用浓度不是拍脑袋想出来的，要做方阵滴定实验确定（计算P/N）。
2、封闭液换一下成分（BSA、胰蛋白等）。
3、可以考虑延长显色时间。
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专注、专心、专业
2楼2011-08-04 08:08:35
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