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friya0910

新虫 (正式写手)

[交流] 原核表达 已有4人参与

想请教一下论坛里的大侠们，IPTG诱导以后，收集菌液后菌液要做如何处理再上样啊？看别人的论文里都是说收集菌液，然后就SDS-PAGE电泳了，具体怎么操作呢？
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【分子生物】EPI帖

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1楼 2011-08-01 11:38:37
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
收集菌液后离心，收集菌体，加入一定体积的无菌水（量根据菌体的量来定的），然后加入等体积2*loading buffer，煮沸10min，12000rpm 1min离心后就可以上样了。
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2楼2011-08-01 12:01:48
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friya0910

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lxj341401 at 2011-08-01 12:01:48:
收集菌液后离心，收集菌体，加入一定体积的无菌水（量根据菌体的量来定的），然后加入等体积2*loading buffer，煮沸10min，12000rpm 1min离心后就可以上样了。

谢谢知道啊！那个加无菌水的量说是根据菌体的量来定，有没有一个经验值啊？比如说我取1mL菌液离心后得到的菌体一般用多少体积的无菌水重悬啊？
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3楼2011-08-01 12:13:40
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
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西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good！一起奖励！ 2011-08-01 16:54:32
引用回帖:
3楼: Originally posted by friya0910 at 2011-08-01 12:13:40:
谢谢知道啊！那个加无菌水的量说是根据菌体的量来定，有没有一个经验值啊？比如说我取1mL菌液离心后得到的菌体一般用多少体积的无菌水重悬啊？

1mL菌液里面的菌也不一样的，有些人是先调整到相同的OD值，然后加同样的水，你多跑几次就知道了，通过上样量调节也可以的。
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4楼2011-08-01 13:19:32
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li1977li

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
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西瓜(金币+3): 鼓励下 2011-08-01 16:54:42
我们实验室一般是3ml的菌液离心后的菌体加100ul重悬后取8--10ul和上样缓冲液煮沸10min后上样。
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5楼2011-08-01 14:12:24
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lxjwishes

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
我也正在做呢 学习一下
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pleasemywings,flymeaway.
6楼2011-08-11 16:08:44
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匿名

用户注销 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
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西瓜(金币+5, MolEPI+1): 说得很好！还有沉淀的部分，补充下吧。 2011-08-12 18:21:34
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friya0910
7楼2011-08-12 16:26:20
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friya0910

新虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by lmxu0917 at 2011-08-12 16:26:20:
其实你IPTG诱导后应该把样品分成全菌，沉淀，上清三个部分进行SDS_PAGE分析，否则你怎么知道你的蛋白是以可溶的还是包涵体的形式表达的呢？！
我的实验室的方法如下：希望对你有帮助。
全菌：收集1ml菌液后离心 ...

多谢指点！
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8楼2011-08-14 14:55:23
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friya0910

新虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by lmxu0917 at 2011-08-12 16:26:20:
其实你IPTG诱导后应该把样品分成全菌，沉淀，上清三个部分进行SDS_PAGE分析，否则你怎么知道你的蛋白是以可溶的还是包涵体的形式表达的呢？！
我的实验室的方法如下：希望对你有帮助。
全菌：收集1ml菌液后离心 ...

我想请教您一下，你们跑的SDS-PAGE用的是大板胶还是小板胶啊？
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9楼2011-08-27 13:02:57
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匿名

用户注销 (正式写手)
★ ★ ★
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西瓜(金币+2): Good 2011-08-29 16:32:45
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10楼2011-08-29 10:52:20
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