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suixing1956

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助全基因合成

打算找公司合成一段1100个碱基的DNA序列,有启动子和终止子。想要在序列两端引入Bind HI和XhoI,该如何设计?是直接在序列两端引入酶切位点吗?恳请赐教!
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MarchZR

银虫 (小有名气)

既然是找公司做的,直接找做基因合成服务的公司,全权负责
18楼2015-07-06 17:33:08
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-08-01 08:17:56
你如果是用来表达的,就不需要启动子和终止子了。想要在序列两端引入Bind HI和XhoI,就直接在两端加酶切位点就是,不需要什么特别的设计,只需要分析下你的目的基因中有没有这两个酶切位点,免得后面酶切时把目的基因也切断了,然后委托合成,合成现在也便宜的,三块多/bp。
2楼2011-07-31 21:39:35
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gwbk

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, MolEPI+1): 一并奖励 2011-08-01 08:19:32
suixing1956(金币+2): 了解了,非常感谢。 2011-08-01 08:47:10
2楼的牛人说的不错滴~我补充一下,嘿嘿
我在生工合成,3块钱1个碱基。合成完了才听说捷瑞2块7一个碱基,。
1,二楼说的很有道理,如果是pET载体表达的话,可以没有起始终止密码子,但是必须注意加酶切位点有没有移码突变。还有一种情况是载体本身没有起始密码子的表达载体,这时需要加上的。
2,直接在设计基因两端加酶切序列。这个生工的服务还是可以的,开始合成基因的时候,我没有加起始终止密码子和酶切位点的,打算合成一些带酶切位点和起始终止密码子的引物,PCR后切胶回收~生工的孔繁静(Refuse AD,人确实很耐心)提示我是不是加上酶切位点和起始终止密码子,到时候直接提质粒酶切就可以了~~考虑虽然加上十几个碱基贵点,但是后面操作省了很多,值了,如果后面免不了用特异性引物PCR验证,也可以用引物的方式加进去酶切位点序列和起始终止密码子,引物合成有公司一块钱一个碱基,提供4OD的量,哈哈,竞争吧,呵呵。
3,值得提醒的是,合成基因做表达的话,基因序列可以免费到公司做密码子优化设计的。优化后,看看基因内部有没有酶切位点,这个有木有基因合成公司会提醒你的。
4,合成时间,很快,我的10天左右就可以拿到3条基因~
3楼2011-07-31 22:24:08
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gwbk

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 热心哈 2011-08-01 17:03:00
起始终止子......表达载体一般都有的,嘿嘿。特此更正。
如果楼主要做pMD、pUC等克隆载体的表达,必须加上启动子终止子和SD序列。。。我做过pMD 18 T Vector的表达,还可以的~
起始终止密码子、酶切位点设计没有什么特殊要求
合成1bp 3块钱,不是一碱基

有问题可以“引用回复”或站内信通知我。
4楼2011-08-01 00:35:45
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