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lw582482481

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
amisking(金币+4, EPI+1): 鼓励应助 2011-07-17 19:12:30
zxzhouwhu(金币+4): 2011-08-04 11:01:31
关于细胞消化的问题:
1.胰酶一般是在37度预热,这样消化效果比较好
2.  对于比较好消化的细胞以及贴壁容易掉落的细胞如293t之类的,胰酶可以预热或者不预热都可以,一般很快就可以消化下来,而且这类细胞消化时间不宜长,对细胞自身不好。一般是通过吹打使细胞分散成单个的。
3.对于较难消化的细胞,例如一般的上皮细胞(hela,L02,COS)之类的,我一般是采用弃掉培养基之后,小加入少量的胰酶,预消化一次,大约几十秒吧,然后吸掉(这个是为了预消化的同时去掉未吸干净的培养基,培养基对于胰酶的消化有抑制作用),再加入新的胰酶(预热好的),2-3分钟即可。
4 对于特别难消化的细胞,你可以直接将预热的培养基加入细胞之中,并且在37度消化,你自己注意时间,别太过了,很容易过头。这个是我们之前培养MDCK这种十分紧密的上皮细胞采取的办法。
对于你的MCF-10a  ,没有养过。你可以采取较难消化的那种,实在不行的话你就在37度消化吧。
  
此外,个人认为将胰酶预热至37度是极为重要的。因为我们保存胰酶是在4度,胰酶消化的合适温度为37度
30而立
4楼2011-07-16 22:12:57
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