应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » MCF-10A细胞消化问题请教，谢谢！
51/1返回列表
查看: 3453  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

zxzhouwhu

铜虫 (初入文坛)

[求助] MCF-10A细胞消化问题请教，谢谢！

培养人正常乳腺细胞MCF-10A，发现非常难消化下来，我用的是胰酶+EDTA的消化液，都消化快30分钟啦，还是吹大不下来，不知道大家有养过这个细胞的没有，有什么经验？非常感谢，急切等待大家回复！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-07-16 17:50:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lw582482481

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
amisking(金币+4, EPI+1): 鼓励应助 2011-07-17 19:12:30
zxzhouwhu(金币+4): 2011-08-04 11:01:31
关于细胞消化的问题：
1.胰酶一般是在37度预热，这样消化效果比较好
2.  对于比较好消化的细胞以及贴壁容易掉落的细胞如293t之类的，胰酶可以预热或者不预热都可以，一般很快就可以消化下来，而且这类细胞消化时间不宜长，对细胞自身不好。一般是通过吹打使细胞分散成单个的。
3.对于较难消化的细胞，例如一般的上皮细胞（hela，L02，COS）之类的，我一般是采用弃掉培养基之后，小加入少量的胰酶，预消化一次，大约几十秒吧，然后吸掉（这个是为了预消化的同时去掉未吸干净的培养基，培养基对于胰酶的消化有抑制作用），再加入新的胰酶（预热好的），2-3分钟即可。
4 对于特别难消化的细胞，你可以直接将预热的培养基加入细胞之中，并且在37度消化，你自己注意时间，别太过了，很容易过头。这个是我们之前培养MDCK这种十分紧密的上皮细胞采取的办法。
对于你的MCF-10a  ，没有养过。你可以采取较难消化的那种，实在不行的话你就在37度消化吧。
  
此外，个人认为将胰酶预热至37度是极为重要的。因为我们保存胰酶是在4度，胰酶消化的合适温度为37度
赞一下(4人) 回复此楼
30而立
4楼2011-07-16 22:12:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

dhd997

荣誉版主 (文坛精英)

自由人，我型我秀！

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-07-17 20:19:31
zxzhouwhu(金币+2): 2011-08-04 11:01:17
加胰酶之前，有没有洗一下，我们会用PBS洗一下的。还有胰酶保藏合适吗？有没有失效？再就是消化的标准是什么？变的非常圆，有的细胞不是的。细胞与细胞之间有间隙了就好了
赞一下(2人) 回复此楼
人生不过几十年，成败荣辱都在天，是非恩怨莫在意，健康快乐最值钱，自古人间苦无边，看得高远境如仙，愿你不为凡事恼，轻松快乐每一天。
2楼2011-07-16 18:54:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuandian114

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
amisking(金币+4): 鼓励应助 2011-07-16 20:27:50
zxzhouwhu(金币+2): 2011-08-04 11:01:24
可能是胰酶失活或者EDTA不够。
改进方式：
1.建议采用PBS配置胰酶以维持稳定的PH环境并添加EDTA。
2.消化前先用PBS清洗细胞。
3.如果lz很急的话，可以往配置好的胰酶中添加灭菌的EDTA。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-07-16 19:20:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nagasaki

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

zxzhouwhu(金币+2): 2011-08-04 11:01:36
我现在就在养这个细胞，

先用pbs先一遍，然后加胰酶37度消化10-15分钟，基本上可以消化下来
赞一下 回复此楼
希望和同行有更多的交流机会！
5楼2011-07-18 09:36:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 304求调剂 +6 司空. 2026-03-18 6/300 2026-03-18 23:03 by 星空星月
[考研] 材料专业求调剂 +5 hanamiko 2026-03-18 5/250 2026-03-18 20:19 by 星空星月
[考研] 一志愿985，本科211，0817化学工程与技术319求调剂 +7 Liwangman 2026-03-15 7/350 2026-03-18 20:08 by walc
[考研] 材料专硕英一数二306 +4 z1z2z3879 2026-03-18 4/200 2026-03-18 20:00 by 楤哥
[考研] 26调剂/材料/英一数二/总分289/已过A区线 +7 步川酷紫123 2026-03-13 7/350 2026-03-18 17:12 by 尽舜尧1
[考研] 286求调剂 +6 lemonzzn 2026-03-16 9/450 2026-03-18 15:31 by vgtyfty
[考研] 0703化学调剂 +4 pupcoco 2026-03-17 7/350 2026-03-18 12:14 by djl2006
[基金申请] 被我言中：新模板不强调格式了，假专家开始管格式了 +4 beefly 2026-03-14 4/200 2026-03-17 22:04 by 黄鸟于飞Chao
[考研] 296求调剂 +5 大口吃饭 身体健 2026-03-13 5/250 2026-03-17 21:05 by 不惑可乐
[考研] 308求调剂 +4 是Lupa啊 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:12 by ruiyingmiao
[考研] 085600材料与化工求调剂 +5 绪幸与子 2026-03-17 5/250 2026-03-17 16:40 by laoshidan
[考研] 一志愿苏州大学材料工程（085601）专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +6 大火山小火山 2026-03-16 8/400 2026-03-17 15:05 by 无懈可击111
[论文投稿] 有没有大佬发小论文能带我个二作 +3 增锐漏人 2026-03-17 4/200 2026-03-17 09:26 by xs74101122
[考研] 东南大学364求调剂 +5 JasonYuiui 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:28 by 木瓜膏
[考研] 304求调剂 +3 曼殊2266 2026-03-14 3/150 2026-03-16 16:39 by houyaoxu
[考研] 0703化学调剂 290分有科研经历，论文在投 +7 腻腻gk 2026-03-14 7/350 2026-03-16 10:12 by houyaoxu
[考研] 材料与化工 323 英一+数二+物化，一志愿：哈工大 本人本科双一流 +4 自由的_飞翔 2026-03-13 5/250 2026-03-14 19:39 by hmn_wj
[考研] 265求调剂 +4 威化饼07 2026-03-12 4/200 2026-03-14 17:23 by userper
[考研] 328求调剂 +3 5201314Lsy！ 2026-03-13 6/300 2026-03-14 15:31 by hyswxzs
[考研] 材料工程调剂 +9 咪咪空空 2026-03-12 9/450 2026-03-13 22:05 by 星空星月
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭