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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » MCF-10A细胞消化问题请教，谢谢！
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zxzhouwhu

铜虫 (初入文坛)

[求助] MCF-10A细胞消化问题请教，谢谢！

培养人正常乳腺细胞MCF-10A，发现非常难消化下来，我用的是胰酶+EDTA的消化液，都消化快30分钟啦，还是吹大不下来，不知道大家有养过这个细胞的没有，有什么经验？非常感谢，急切等待大家回复！
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1楼 2011-07-16 17:50:36
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lw582482481

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
amisking(金币+4, EPI+1): 鼓励应助 2011-07-17 19:12:30
zxzhouwhu(金币+4): 2011-08-04 11:01:31
关于细胞消化的问题：
1.胰酶一般是在37度预热，这样消化效果比较好
2.  对于比较好消化的细胞以及贴壁容易掉落的细胞如293t之类的，胰酶可以预热或者不预热都可以，一般很快就可以消化下来，而且这类细胞消化时间不宜长，对细胞自身不好。一般是通过吹打使细胞分散成单个的。
3.对于较难消化的细胞，例如一般的上皮细胞（hela，L02，COS）之类的，我一般是采用弃掉培养基之后，小加入少量的胰酶，预消化一次，大约几十秒吧，然后吸掉（这个是为了预消化的同时去掉未吸干净的培养基，培养基对于胰酶的消化有抑制作用），再加入新的胰酶（预热好的），2-3分钟即可。
4 对于特别难消化的细胞，你可以直接将预热的培养基加入细胞之中，并且在37度消化，你自己注意时间，别太过了，很容易过头。这个是我们之前培养MDCK这种十分紧密的上皮细胞采取的办法。
对于你的MCF-10a  ，没有养过。你可以采取较难消化的那种，实在不行的话你就在37度消化吧。
  
此外，个人认为将胰酶预热至37度是极为重要的。因为我们保存胰酶是在4度，胰酶消化的合适温度为37度
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30而立
4楼2011-07-16 22:12:57
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dhd997

荣誉版主 (文坛精英)

自由人，我型我秀！

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-07-17 20:19:31
zxzhouwhu(金币+2): 2011-08-04 11:01:17
加胰酶之前，有没有洗一下，我们会用PBS洗一下的。还有胰酶保藏合适吗？有没有失效？再就是消化的标准是什么？变的非常圆，有的细胞不是的。细胞与细胞之间有间隙了就好了
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人生不过几十年，成败荣辱都在天，是非恩怨莫在意，健康快乐最值钱，自古人间苦无边，看得高远境如仙，愿你不为凡事恼，轻松快乐每一天。
2楼2011-07-16 18:54:13
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yuandian114

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
amisking(金币+4): 鼓励应助 2011-07-16 20:27:50
zxzhouwhu(金币+2): 2011-08-04 11:01:24
可能是胰酶失活或者EDTA不够。
改进方式：
1.建议采用PBS配置胰酶以维持稳定的PH环境并添加EDTA。
2.消化前先用PBS清洗细胞。
3.如果lz很急的话，可以往配置好的胰酶中添加灭菌的EDTA。
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3楼2011-07-16 19:20:58
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nagasaki

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

zxzhouwhu(金币+2): 2011-08-04 11:01:36
我现在就在养这个细胞，

先用pbs先一遍，然后加胰酶37度消化10-15分钟，基本上可以消化下来
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希望和同行有更多的交流机会！
5楼2011-07-18 09:36:20
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