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冰释樱释

新虫 (初入文坛)

[求助] 斑点杂交的一些疑问

各位大虾们好!我是新手,有问题求助,急!
我正准备做斑点杂交,计划是同一个mRNA模板和10条不同的经荧光标记的寡核苷酸探针杂交,可以在同一张膜上做吗?各个探针之间会不会产生干扰?需不需要分开来一个膜做一个探针?
希望能得到大家的指点!不胜感激!
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yuandian114

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
amisking(金币+3, EPI+1): 鼓励应助 2011-07-16 20:27:41
可以的,结合了待测RNA的膜与探针杂交后可经碱变性或热变性的方法将探针洗脱,膜可反复使用与其他探针杂交。。
具体方法如下:
杂交的膜(注意:杂交过的膜在保存过程中不能干燥,否则探针将会与膜形成不可逆的结合)置于100°C 0.5%SDS中煮沸3min,自然冷却至室温后,将膜放入双蒸水中漂洗2~3遍。取出膜,用滤纸吸去膜表面的水分。将膜直接进行另一探针的杂交或用保鲜膜包好,室温下真空保存。
2楼2011-07-16 19:28:48
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3楼2017-08-19 08:42:48
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4楼2017-08-21 07:09:12
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5楼2017-08-22 10:48:23
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