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冰释樱释

新虫 (初入文坛)

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[求助] 斑点杂交的一些疑问

各位大虾们好！我是新手，有问题求助，急！
我正准备做斑点杂交，计划是同一个mRNA模板和10条不同的经荧光标记的寡核苷酸探针杂交，可以在同一张膜上做吗？各个探针之间会不会产生干扰？需不需要分开来一个膜做一个探针？
希望能得到大家的指点！不胜感激！

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1楼2011-07-16 00:20:18

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yuandian114

银虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
amisking(金币+3, EPI+1): 鼓励应助 2011-07-16 20:27:41

可以的，结合了待测RNA的膜与探针杂交后可经碱变性或热变性的方法将探针洗脱，膜可反复使用与其他探针杂交。。
具体方法如下：
杂交的膜（注意：杂交过的膜在保存过程中不能干燥，否则探针将会与膜形成不可逆的结合）置于100°C 0.5%SDS中煮沸3min，自然冷却至室温后，将膜放入双蒸水中漂洗2~3遍。取出膜，用滤纸吸去膜表面的水分。将膜直接进行另一探针的杂交或用保鲜膜包好，室温下真空保存。