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冼亮淀粉酶

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生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, EPI+1): 2011-07-15 10:27:48
这两个填料虽然都是离子交换用的,但一个是弱阴一个是弱阳,效果不同,没有一个能代替另一个的说法。

羧甲基纤维素是弱阳离子交换填料,要求使用时的pH值要低于目的蛋白质等电点起码0.5个pH值单位,为了达到较好的分离效果,实际使用时最好是低于1个以上pH值单位。在低pH值下,有的不耐酸的杂质蛋白质会变性,届时离心除去,可首先去除一部分杂质蛋白质。

DEAE纤维素是弱阴离子交换层析填料,要求使用时的pH值要高于目的蛋白质等电点起码0.5个pH值单位,为了达到较好的分离效果,实际使用时最好是高于1个以上pH值单位。大多数蛋白质的等电点在6.0左右,可以耐受8.0,所以依据pH提高使得某些杂质蛋白质变性的做法多数情况下不可行。

这两种填料的工作pH值不同,但都可以用氯化钠来洗脱。交换基团不同,分离效果也不同,可以先用一种来纯化,得到初步纯化的产物之后再用另一种来纯化。因为有些蛋白质不能耐受酸,所以我建议先用羧甲基纤维素弱阴离子交换层析,再用DEAE纤维素弱阳离子交换层析,产物的纯度比单用一种时更高。

在对蛋白质的破坏方面,弱交换填料比强交换填料好,有的蛋白质用强离子交换来纯化,蛋白质结合再交换之后会损失很多活力,但是弱离子交换则损失的活力较少。但是弱离子交换的分辨率比强离子交换差一些。如果纯化得不好,又有强离子交换的,就试一下吧。

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流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2011-07-15 06:00:21
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