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冼亮淀粉酶

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生物大分子降解酶

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, EPI+1): 2011-07-15 10:27:48

这两个填料虽然都是离子交换用的，但一个是弱阴一个是弱阳，效果不同，没有一个能代替另一个的说法。

羧甲基纤维素是弱阳离子交换填料，要求使用时的pH值要低于目的蛋白质等电点起码0.5个pH值单位，为了达到较好的分离效果，实际使用时最好是低于1个以上pH值单位。在低pH值下，有的不耐酸的杂质蛋白质会变性，届时离心除去，可首先去除一部分杂质蛋白质。

DEAE纤维素是弱阴离子交换层析填料，要求使用时的pH值要高于目的蛋白质等电点起码0.5个pH值单位，为了达到较好的分离效果，实际使用时最好是高于1个以上pH值单位。大多数蛋白质的等电点在6.0左右，可以耐受8.0，所以依据pH提高使得某些杂质蛋白质变性的做法多数情况下不可行。

这两种填料的工作pH值不同，但都可以用氯化钠来洗脱。交换基团不同，分离效果也不同，可以先用一种来纯化，得到初步纯化的产物之后再用另一种来纯化。因为有些蛋白质不能耐受酸，所以我建议先用羧甲基纤维素弱阴离子交换层析，再用DEAE纤维素弱阳离子交换层析，产物的纯度比单用一种时更高。

在对蛋白质的破坏方面，弱交换填料比强交换填料好，有的蛋白质用强离子交换来纯化，蛋白质结合再交换之后会损失很多活力，但是弱离子交换则损失的活力较少。但是弱离子交换的分辨率比强离子交换差一些。如果纯化得不好，又有强离子交换的，就试一下吧。