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lxjwishes

银虫 (正式写手)

[求助] 有没有做植物重金属胁迫方面的朋友

获得了一批转基因烟草材料
想看看是否具有抗重金属的特性
但还不知道如何开展
求赐教
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pleasemywings,flymeaway.
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forestbin

铜虫 (小有名气)

(目标)烟草 我觉得主要还是应该从“抗”入手,而不应把精力放在“耐”上:即外部浓度在多高的情况下,生物量没有显著受到抑制,且体内累积的重金属也少。这样意义才比较大。
(指标)有了目标,需要测定的指标也就好定了。不要急于上分子试验。可以先从简单的培养试验开始。比如Cd为例,土培的话,0,1,2,5,10 ppm试一下。水培的话,0,0.5,1.0,1.5,3.0 ppm较为合适(因为水中Cd活度远高于土壤。)
建议土培,比较方便,参照常规的种植技术就可以了。配置Cd土时,最好不要直接浇溶液,这样很难做到均匀。可将少量土壤溶在高浓度的Cd溶液中,慢慢晾干,即为母土。再将母土按比例均匀的掺入无污染的图中。
水培的话,将烟草在石英砂或珍珠岩里生长,浇灌1/4左右浓度的霍格兰营养液,然后过一段时间再移栽在水培灌里。注意每天要打气。
考察的指标,就是地上部和根部的生物量,以及其中的Cd浓度,以确定上面所提的目标。
(机理)有了初步的研究结果,就可以根据此结果研究其机理,即为什么会这样。可以分析抗氧化系统(SOD、POD、CAT、H2O2、GSH等等),此为常用的耐性指标。也可以分析细胞壁及细胞质中Cd浓度,是否有细胞壁固定作用。如果再为深入,就研究膜上的转移蛋白,及H+泵等,对应的基因是否上调?是否是“拒”吸的内在因素。
(原则)烟草如果体内累积较多的重金属,即使其再有耐性,也失去了其应用的意义。
PS:上述只是实验室机理的工作,浓度若设的低,从机理研究上,可能所得结果差异很小,误差较大,最后甚至是徒劳无功。而大田土壤Cd浓度1ppm 为国标,若考虑实际应用,不考虑机理,可酌情缩减试验浓度。

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9楼2011-08-07 19:18:24
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪

很热门的研究
应该有很多朋友做的
青春的岁月,我们身不由己,只因这胸中燃烧的梦想!
2楼2011-07-14 16:49:18
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咸鱼

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
jhu132llh(金币+2, EPI+1): good,版主积极应助 2011-07-16 18:09:25
lxjwishes(金币+3): 现在在纠结胁迫浓度和加了胁迫物质,我想做的有重金属,激素,还有盐胁迫和PEG,培养基可否灭菌的问题 2011-07-18 08:59:32
引用回帖:
Originally posted by lxjwishes at 2011-07-14 15:22:20:
获得了一批转基因烟草材料
想看看是否具有抗重金属的特性
但还不知道如何开展
求赐教

我不是做重金属的,但是知道一点点胁迫相关的东东

我觉得首先得鉴定吧,在MS板上加上相应的重金属盐,观察症状,看其是否确实抗重金属

然后可以找一些paper中提到的相关重金属胁迫的基因,做Real-time或Northern来看你的转基因烟草相对于WT烟草是否重金属胁迫相关基因的mRNA表达水平有变化,进而确定你的转基因是哪个通路上的~
3楼2011-07-14 22:24:17
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younggatt

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


咸鱼(金币+1): 鼓励参与讨论~ 2011-07-15 13:08:04
lxjwishes(金币+2): 多谢 2011-07-18 08:59:58
现在有关重金属比如铝、镉等研究很多,主要采取水培的措施,中文文献很多,花生、水稻和小麦方面的研究很多,楼主可以查点文献看看
把简单的事情重复重复再重复就成功了
4楼2011-07-15 10:04:47
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