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有没有做植物重金属胁迫方面的朋友
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获得了一批转基因烟草材料 想看看是否具有抗重金属的特性 但还不知道如何开展 求赐教 |
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（目标）烟草 我觉得主要还是应该从“抗”入手，而不应把精力放在“耐”上：即外部浓度在多高的情况下，生物量没有显著受到抑制，且体内累积的重金属也少。这样意义才比较大。 （指标）有了目标，需要测定的指标也就好定了。不要急于上分子试验。可以先从简单的培养试验开始。比如Cd为例，土培的话，0,1,2,5,10 ppm试一下。水培的话，0,0.5,1.0,1.5,3.0 ppm较为合适（因为水中Cd活度远高于土壤。） 建议土培，比较方便，参照常规的种植技术就可以了。配置Cd土时，最好不要直接浇溶液，这样很难做到均匀。可将少量土壤溶在高浓度的Cd溶液中，慢慢晾干，即为母土。再将母土按比例均匀的掺入无污染的图中。 水培的话，将烟草在石英砂或珍珠岩里生长，浇灌1/4左右浓度的霍格兰营养液，然后过一段时间再移栽在水培灌里。注意每天要打气。 考察的指标，就是地上部和根部的生物量，以及其中的Cd浓度，以确定上面所提的目标。 （机理）有了初步的研究结果，就可以根据此结果研究其机理，即为什么会这样。可以分析抗氧化系统（SOD、POD、CAT、H2O2、GSH等等），此为常用的耐性指标。也可以分析细胞壁及细胞质中Cd浓度，是否有细胞壁固定作用。如果再为深入，就研究膜上的转移蛋白，及H+泵等，对应的基因是否上调？是否是“拒”吸的内在因素。 （原则）烟草如果体内累积较多的重金属，即使其再有耐性，也失去了其应用的意义。 PS：上述只是实验室机理的工作，浓度若设的低，从机理研究上，可能所得结果差异很小，误差较大，最后甚至是徒劳无功。而大田土壤Cd浓度1ppm 为国标，若考虑实际应用，不考虑机理，可酌情缩减试验浓度。 |
lxjwishes9楼2011-08-07 19:18:24
jhu132llh
荣誉版主 (知名作家)
大洪
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2楼2011-07-14 16:49:18
【答案】应助回帖
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jhu132llh(金币+2, EPI+1): good,版主积极应助 2011-07-16 18:09:25
lxjwishes(金币+3): 现在在纠结胁迫浓度和加了胁迫物质，我想做的有重金属，激素，还有盐胁迫和PEG，培养基可否灭菌的问题 2011-07-18 08:59:32
jhu132llh(金币+2, EPI+1): good,版主积极应助 2011-07-16 18:09:25
lxjwishes(金币+3): 现在在纠结胁迫浓度和加了胁迫物质，我想做的有重金属，激素，还有盐胁迫和PEG，培养基可否灭菌的问题 2011-07-18 08:59:32
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我不是做重金属的，但是知道一点点胁迫相关的东东 我觉得首先得鉴定吧，在MS板上加上相应的重金属盐，观察症状，看其是否确实抗重金属 然后可以找一些paper中提到的相关重金属胁迫的基因，做Real-time或Northern来看你的转基因烟草相对于WT烟草是否重金属胁迫相关基因的mRNA表达水平有变化，进而确定你的转基因是哪个通路上的~ |
3楼2011-07-14 22:24:17
4楼2011-07-15 10:04:47
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