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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 有没有做植物重金属胁迫方面的朋友
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lxjwishes

银虫 (正式写手)

[求助] 有没有做植物重金属胁迫方面的朋友

获得了一批转基因烟草材料
想看看是否具有抗重金属的特性
但还不知道如何开展
求赐教
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pleasemywings,flymeaway.
1楼 2011-07-14 15:22:20
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

forestbin

铜虫 (小有名气)
（目标）烟草 我觉得主要还是应该从“抗”入手，而不应把精力放在“耐”上：即外部浓度在多高的情况下，生物量没有显著受到抑制，且体内累积的重金属也少。这样意义才比较大。
（指标）有了目标，需要测定的指标也就好定了。不要急于上分子试验。可以先从简单的培养试验开始。比如Cd为例，土培的话，0,1,2,5,10 ppm试一下。水培的话，0,0.5,1.0,1.5,3.0 ppm较为合适（因为水中Cd活度远高于土壤。）
建议土培，比较方便，参照常规的种植技术就可以了。配置Cd土时，最好不要直接浇溶液，这样很难做到均匀。可将少量土壤溶在高浓度的Cd溶液中，慢慢晾干，即为母土。再将母土按比例均匀的掺入无污染的图中。
水培的话，将烟草在石英砂或珍珠岩里生长，浇灌1/4左右浓度的霍格兰营养液，然后过一段时间再移栽在水培灌里。注意每天要打气。
考察的指标，就是地上部和根部的生物量，以及其中的Cd浓度，以确定上面所提的目标。
（机理）有了初步的研究结果，就可以根据此结果研究其机理，即为什么会这样。可以分析抗氧化系统（SOD、POD、CAT、H2O2、GSH等等），此为常用的耐性指标。也可以分析细胞壁及细胞质中Cd浓度，是否有细胞壁固定作用。如果再为深入，就研究膜上的转移蛋白，及H+泵等，对应的基因是否上调？是否是“拒”吸的内在因素。
（原则）烟草如果体内累积较多的重金属，即使其再有耐性，也失去了其应用的意义。
PS：上述只是实验室机理的工作，浓度若设的低，从机理研究上，可能所得结果差异很小，误差较大，最后甚至是徒劳无功。而大田土壤Cd浓度1ppm 为国标，若考虑实际应用，不考虑机理，可酌情缩减试验浓度。
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lxjwishes zhaoyu2881
9楼2011-08-07 19:18:24
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪
很热门的研究
应该有很多朋友做的
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青春的岁月，我们身不由己，只因这胸中燃烧的梦想！
2楼2011-07-14 16:49:18
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咸鱼

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
jhu132llh(金币+2, EPI+1): good,版主积极应助 2011-07-16 18:09:25
lxjwishes(金币+3): 现在在纠结胁迫浓度和加了胁迫物质，我想做的有重金属，激素，还有盐胁迫和PEG，培养基可否灭菌的问题 2011-07-18 08:59:32
引用回帖:
Originally posted by lxjwishes at 2011-07-14 15:22:20:
获得了一批转基因烟草材料
想看看是否具有抗重金属的特性
但还不知道如何开展
求赐教

我不是做重金属的，但是知道一点点胁迫相关的东东

我觉得首先得鉴定吧，在MS板上加上相应的重金属盐，观察症状，看其是否确实抗重金属

然后可以找一些paper中提到的相关重金属胁迫的基因，做Real-time或Northern来看你的转基因烟草相对于WT烟草是否重金属胁迫相关基因的mRNA表达水平有变化，进而确定你的转基因是哪个通路上的~
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3楼2011-07-14 22:24:17
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younggatt

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
咸鱼(金币+1): 鼓励参与讨论~ 2011-07-15 13:08:04
lxjwishes(金币+2): 多谢 2011-07-18 08:59:58
现在有关重金属比如铝、镉等研究很多，主要采取水培的措施，中文文献很多，花生、水稻和小麦方面的研究很多，楼主可以查点文献看看
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把简单的事情重复重复再重复就成功了
4楼2011-07-15 10:04:47
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marther

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
jhu132llh(金币+4): 新虫积极应助奖 2011-07-16 18:09:48
lxjwishes(金币+4): 谢谢，请问是从播种开始做吗，就是把种子播在胁迫培养基上，统计发芽率吗 2011-07-18 09:01:19
我做这方面 可以先从种子萌芽开始做，然后做幼苗实验 ，先做水培再做做土培，有相关文献可以参考，个人意见哈
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5楼2011-07-16 10:33:17
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咸鱼

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

lxjwishes(金币+1): thanks 2011-07-22 11:50:03
引用回帖:
Originally posted by lxjwishes at 2011-07-14 15:22:20:
获得了一批转基因烟草材料
想看看是否具有抗重金属的特性
但还不知道如何开展
求赐教

具体浓度得查相关文献，而且应该是要做梯度浓度的~
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6楼2011-07-18 12:37:36
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Violet2118

金虫 (小有名气)
记得我当时就是先查了很多相关文献，然后确定重金属种类和浓度梯度，沙培，然后浓度按一定规律逐步提升到目标浓度，每浓度3重复。养了好几个月了收叶子，研磨制备样品，然后进行各项指标测定。一般要测定的指标及方法在相关文献里也都有了。话说测定写文章都还好，养草养了好久。。。
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7楼2011-08-02 05:21:52
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beimi

木虫 (著名写手)
你要是把材料借给我，就好了
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8楼2011-08-06 17:29:41
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lxjwishes

银虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by forestbin at 2011-08-07 19:18:24:
（目标）烟草 我觉得主要还是应该从“抗”入手，而不应把精力放在“耐”上：即外部浓度在多高的情况下，生物量没有显著受到抑制，且体内累积的重金属也少。这样意义才比较大。
（指标）有了目标，需要测定的指标 ...

我用了100umol 也没有看出个区别来呢  把幼苗接种在培养基中
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pleasemywings,flymeaway.
10楼2011-08-09 17:31:59
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