应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 基因克隆
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
61/1返回列表
查看: 730  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

yanjing2001

银虫 (小有名气)

[交流] 基因克隆 已有3人参与

我做的是截短启动子片段（1.5kk～0.2kb）和pGL4.10连接：先做了TA克隆，测序正确后，提质粒双酶切后和载体片段连接，我试过了7：1和14：1进行连接，用的是takara的solution 1连接kit 16度连接16小时。目的片段双酶切和载体都没有问题，遇到的问题是转化后总是没有菌生长，希望不吝指导！非常感谢
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2011-07-11 09:00:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

icebergwu
2楼2011-07-11 09:18:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

青菜小虫

银虫 (著名写手)

风居住的街道

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
看天(金币+2): 鼓励交流 2011-07-11 16:27:33
你确定感受态没问题吗？还有体系，我一般是载体和目的片段solution 1分别是4:1:5。10ul体系。
赞一下(2人) 回复此楼
生命即这般无尽变数，辗转来去皆苛求不得
3楼2011-07-11 14:29:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yesucao

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
感受态？？抗生素及其浓度？？还有就是你的载体1微升是不是太少了啊？？做转化的时候是不是42°热激？？不能高于42°？？？
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-07-11 21:20:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yanjing2001

银虫 (小有名气)
感谢大家的回帖帮助，我的TA克隆已经成功了，现在连目的载体失败！我用的7：1和14：1是出入片段与载体的摩尔比；抗生素Amp用100微克/ml；42度热激应该没问题；我做了转化阳性对照，感受态应该没问题！
赞一下 回复此楼
5楼2011-07-12 17:35:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yanjing2001

银虫 (小有名气)
实在是找不到原因所在，高手再帮忙分析分析
赞一下 回复此楼
6楼2011-07-12 17:39:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yanjing2001 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600材料与化工调剂 +4 kikiki7 2026-03-30 4/200 2026-03-30 06:46 by zhyzzh
[考研] 各位老师好，我的一志愿为北京科技大学085601材料专硕 +9 Koxui 2026-03-28 9/450 2026-03-29 20:43 by 无际的草原
[考研] 294分080500材料科学与工程求调剂 +8 柳溪边 2026-03-26 8/400 2026-03-29 20:42 by 唐沐儿
[考研] 总分293求调剂 +8 加一一九 2026-03-25 11/550 2026-03-29 19:53 by 无际的草原
[考研] 085600 材料与化工 329分求调剂 +14 Mr. Z 2026-03-25 14/700 2026-03-29 17:27 by 学员8dgXkO
[考研] 0856求调剂 +13 zhn03 2026-03-25 14/700 2026-03-29 08:13 by fmesaito
[考研] 322求调剂 +7 宋明欣 2026-03-27 7/350 2026-03-28 21:27 by sanrepian
[考研] 286求调剂 +12 PolarBear11 2026-03-26 12/600 2026-03-28 12:14 by zllcz
[考研] 291求调剂 +15 hhhhxn.. 2026-03-23 21/1050 2026-03-28 11:26 by self2008
[考研] 311求调剂 +3 希望上岸阿小杨 2026-03-23 3/150 2026-03-28 07:57 by 热情沙漠
[考研] 086502化学工程342求调剂 +6 阿姨复古不过 2026-03-27 6/300 2026-03-28 07:06 by wangy0907
[考研] 285求调剂 +4 AZMK 2026-03-27 7/350 2026-03-27 20:59 by AZMK
[考研] 一志愿211院校 344分 东北农业大学生物学学硕，求调剂 +5 丶风雪夜归人丶 2026-03-26 8/400 2026-03-27 19:22 by 丶风雪夜归人丶
[考研] 一志愿上海理工能源动力（085800）310分求调剂 +3 zhangmingc 2026-03-27 4/200 2026-03-27 19:01 by 给你你注意休息
[考研] 一志愿 西北大学 总分282 英语一62 求调剂 +7 18419759900 2026-03-25 8/400 2026-03-27 16:38 by 18419759900
[考研] 298调剂 +3 jiyingjie123 2026-03-27 3/150 2026-03-27 11:57 by wxiongid
[考研] 中国科学院深圳先进技术研究院-光纤传感课题组招生-中国科学院大学、深圳理工大学联培 +5 YangTyu1 2026-03-26 5/250 2026-03-26 18:27 by 猫咪猫咪呀
[考研] 化学调剂一志愿上海交通大学336分-本科上海211 +4 小鱼爱有机 2026-03-25 4/200 2026-03-26 10:19 by aa331100
[考研] 07化学303求调剂 +5 睿08 2026-03-25 5/250 2026-03-25 22:46 by 418490947
[考研] 材料专硕 335 分求调剂 +4 拒绝冷暴力 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:45 by haxia
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭