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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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yanjing2001

银虫 (小有名气)

[交流] 基因克隆 已有3人参与

我做的是截短启动子片段(1.5kk~0.2kb)和pGL4.10连接:先做了TA克隆,测序正确后,提质粒双酶切后和载体片段连接,我试过了7:1和14:1进行连接,用的是takara的solution 1连接kit 16度连接16小时。目的片段双酶切和载体都没有问题,遇到的问题是转化后总是没有菌生长,希望不吝指导!非常感谢
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yanjing2001

银虫 (小有名气)

感谢大家的回帖帮助,我的TA克隆已经成功了,现在连目的载体失败!我用的7:1和14:1是出入片段与载体的摩尔比;抗生素Amp用100微克/ml;42度热激应该没问题;我做了转化阳性对照,感受态应该没问题!
5楼2011-07-12 17:35:17
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青菜小虫

银虫 (著名写手)

风居住的街道

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
看天(金币+2): 鼓励交流 2011-07-11 16:27:33
你确定感受态没问题吗?还有体系,我一般是载体和目的片段solution 1分别是4:1:5。10ul体系。
生命即这般无尽变数,辗转来去皆苛求不得
3楼2011-07-11 14:29:44
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yesucao

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
感受态??抗生素及其浓度??还有就是你的载体1微升是不是太少了啊??做转化的时候是不是42°热激??不能高于42°???
4楼2011-07-11 21:20:59
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yanjing2001

银虫 (小有名气)

实在是找不到原因所在,高手再帮忙分析分析
6楼2011-07-12 17:39:02
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