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cxzcz

新虫 (初入文坛)

[求助] 做抗体的问题

一直用PET28a构建原核表达载体,转化后挑点检测条带正确,提质粒酶切验证这一步,总是提不出质粒或者酶切不出东西。最终目的是要做抗体。知道目的片段的全长,问师兄说直接送去商业公司做多肽也可做抗体,但是特异性不强。我后边要染色质免疫共沉淀,不知抗体特异性不强会不会影响后续试验呢?
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yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

本身pet28a这个载体的问题,它是表达载体,产质粒量少,有时候是很难提质粒
但是你能表达出来蛋白,拿市售抗体验证一下就是了

如果没有市售抗体,比较悲剧。
3楼2011-07-09 09:51:12
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dream-fish

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

抗体的质量很重要。你跟做抗体的公司联系了吗?不要自己埋头做,多和公司交流下,不同的公司用的技术不一样
2楼2011-07-09 09:40:50
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bhpsky

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我没有用过PET-28,一直以来都是用pet-21,或者其他的,可以试着换换表达载体;另外可以让人家合成多肽然后做抗体。这个设计多肽的时候就是要多比对一下,挑选那段最特异的。
4楼2011-07-09 12:41:06
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btx362237729

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

试试加氯霉素增加质粒拷贝数或者增加菌液的量 然后提取质粒吧
人生最黑暗的时光终于过去了
5楼2011-07-09 13:57:27
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