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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 做抗体的问题
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cxzcz

新虫 (初入文坛)

[求助] 做抗体的问题

一直用PET28a构建原核表达载体，转化后挑点检测条带正确，提质粒酶切验证这一步，总是提不出质粒或者酶切不出东西。最终目的是要做抗体。知道目的片段的全长，问师兄说直接送去商业公司做多肽也可做抗体，但是特异性不强。我后边要染色质免疫共沉淀，不知抗体特异性不强会不会影响后续试验呢？
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1楼 2011-07-06 19:31:23
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dream-fish

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

抗体的质量很重要。你跟做抗体的公司联系了吗？不要自己埋头做，多和公司交流下，不同的公司用的技术不一样
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2楼2011-07-09 09:40:50
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yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

本身pet28a这个载体的问题，它是表达载体，产质粒量少，有时候是很难提质粒
但是你能表达出来蛋白，拿市售抗体验证一下就是了

如果没有市售抗体，比较悲剧。
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3楼2011-07-09 09:51:12
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bhpsky

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我没有用过PET-28,一直以来都是用pet-21,或者其他的，可以试着换换表达载体；另外可以让人家合成多肽然后做抗体。这个设计多肽的时候就是要多比对一下，挑选那段最特异的。
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4楼2011-07-09 12:41:06
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btx362237729

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

试试加氯霉素增加质粒拷贝数或者增加菌液的量 然后提取质粒吧
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人生最黑暗的时光终于过去了
5楼2011-07-09 13:57:27
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cxzcz

新虫 (初入文坛)
感谢各位大侠帮助 放弃了 直接多肽合成抗体了
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6楼2012-02-09 09:05:06
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