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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 镍柱纯化蛋白透析出现大量沉淀，请教
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墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫
★ ★
silicare(金币+2): 谢谢参与 2011-07-05 12:18:21
透析液应该调pH
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仕不可不弘毅，任重而道远
11楼2011-07-05 10:43:51
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fallmonkey

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
silicare(金币+4): 谢谢参与 2011-07-05 12:18:13
我倾向认为氯化钠浓度降低造成的。你镍柱纯化下来的蛋白溶液中应该有0.5M氯化钠。我做过的一个蛋白氯化钠浓度低于0.5M溶解度就急剧下降。总之，由蛋白自身性质决定。
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12楼2011-07-05 11:51:31
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triger2011

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by jinpeng_6118 at 2011-06-30 10:31:09:
昨晚镍柱纯化两个蛋白（脂肪酶），上样量为20ml镍柱纯化1L菌液破碎上清（80ml），最后用50ml  500mM咪唑（50mM Tris·Hcl，0.5mM Nacl，10%甘油  ）洗脱，透析：（1）50mM Tris·Hcl，0.2mM Nacl  3L 透析3h，开始 ...

你尝试梯度透析，另外，如果盐离子浓度降低会出现蛋白析出
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努力改变自己！
13楼2011-07-07 08:31:55
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zonegirlcool

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
不知道你的破菌液和平衡液是否一致，破菌液和平衡液都加0.5的NACL应该不影响，洗脱时用你下一步的盐浓度就可以，透析是为了除去什么呢，洗脱时咪唑不用那么高浓度，我没做过酶，我的蛋白只是去咪唑，超滤脱盐都可以。

[ Last edited by zonegirlcool on 2011-7-7 at 09:35 ]
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14楼2011-07-07 09:34:17
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
何不试试“万金油buffer”TGE啊。
屡试不爽。
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VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
15楼2011-07-07 12:29:53
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jinpeng_6118

木虫 (正式写手)
谢谢各位的建议，我这个蛋白试验发现在有机溶剂中比较稳定，我在透析时，加入了5%的乙醇，同时咪唑洗脱浓度降低250mM，纯化回来了。
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人生百态原为海，看破红尘方为岸！
16楼2011-07-11 09:24:05
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shakespace

木虫 (著名写手)

上帝使者
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我的蛋白也是用pet表达，过ni柱子之后，用milipore超滤出盐浓缩之后，杯底也有很多沉淀！我也怀疑是不是蛋白质由于盐浓度低了就析出来了……下一次一定要跑个sdspage检查一下
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天赋使命！
17楼2012-05-19 20:49:14
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穿白大褂约会

禁言 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
18楼2015-09-25 21:01:20
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pineper

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by ganchao1776 at 2011-07-01 00:14:28
估计是NaCl浓度降低后引起的蛋白聚集

如果是这个原因的话，能够复溶么？
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19楼2019-06-14 23:06:19
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