镍柱纯化蛋白透析出现大量沉淀，请教 - 生物科学 - 第2页小木虫论坛-学术科研互动平台

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墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫

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★ ★
silicare(金币+2): 谢谢参与 2011-07-05 12:18:21

透析液应该调pH

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仕不可不弘毅，任重而道远

11楼2011-07-05 10:43:51

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fallmonkey

木虫 (正式写手)

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silicare(金币+4): 谢谢参与 2011-07-05 12:18:13

我倾向认为氯化钠浓度降低造成的。你镍柱纯化下来的蛋白溶液中应该有0.5M氯化钠。我做过的一个蛋白氯化钠浓度低于0.5M溶解度就急剧下降。总之，由蛋白自身性质决定。

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12楼2011-07-05 11:51:31

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triger2011

木虫 (正式写手)

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★
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引用回帖:

Originally posted by jinpeng_6118 at 2011-06-30 10:31:09:
昨晚镍柱纯化两个蛋白（脂肪酶），上样量为20ml镍柱纯化1L菌液破碎上清（80ml），最后用50ml 500mM咪唑（50mM Tris·Hcl，0.5mM Nacl，10%甘油）洗脱，透析：（1）50mM Tris·Hcl，0.2mM Nacl 3L 透析3h，开始 ...

你尝试梯度透析，另外，如果盐离子浓度降低会出现蛋白析出

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努力改变自己！

13楼2011-07-07 08:31:55

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zonegirlcool

金虫 (小有名气)

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★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖

不知道你的破菌液和平衡液是否一致，破菌液和平衡液都加0.5的NACL应该不影响，洗脱时用你下一步的盐浓度就可以，透析是为了除去什么呢，洗脱时咪唑不用那么高浓度，我没做过酶，我的蛋白只是去咪唑，超滤脱盐都可以。

[ Last edited by zonegirlcool on 2011-7-7 at 09:35 ]

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14楼2011-07-07 09:34:17

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