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本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看

yguang

木虫 (职业作家)

应助: 24 (小学生)
金币: 12850.8
红花: 14
帖子: 4683
在线: 618.4小时
虫号: 696608
注册: 2009-02-05
专业: 微生物遗传育种学

★ ★
西瓜(金币+2): 经验很丰富呢！厉害！ 2011-06-30 02:58:14

引用回帖:

Originally posted by yguang at 2011-06-29 11:51:28:
混合用是没问题的，那样用过，也是扩长片段，比例5:1，pfu5。请问楼主扩的片段多长，5K以下直接用普通Taq即可，突变的几率几乎不存在！

5k以下用普通Taq扩，这个可以参考Taq的说明书，本人也做过的，TaKaRa的rTaq和田根普通Taq都用过，也用其他公司的，只要能扩出来的好像还没出过错的。

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11楼2011-06-29 21:18:09

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love_st

金虫 (著名写手)

MolEPI: 1
应助: 48 (小学生)
金币: 285.4
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红花: 6
沙发: 5
帖子: 1596
在线: 1538.2小时
虫号: 743235
注册: 2009-04-08
性别: GG
专业: 系统生物学

★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-06-30 02:58:20

你的pfu量太多，秘诀是1：25

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12楼2011-06-29 21:30:29

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Arrennew

铁杆木虫 (正式写手)

MolEPI: 4
应助: 19 (小学生)
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红花: 2
帖子: 301
在线: 122.9小时
虫号: 322853
注册: 2007-03-12
性别: GG
专业: 林木遗传育种学

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-06-30 02:58:45

buffer一样吗？再说哪有这么麻烦，现在平末端的载体这么多，都有TOP系列了，5分钟转化的，感觉不比TA效率低，好用的很。

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生命不息，探索不止。

13楼2011-06-29 22:22:02

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mahoumeimei

金虫 (小有名气)

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虫号: 1258265
注册: 2011-04-07
性别: MM
专业: 环境微生物学

引用回帖:

Originally posted by hanhaixingyun at 2011-06-29 11:42:10:
好像有保真性高还能加A的，具体既不清楚了。
不过你可以用高保真的做，最后72度10min中的时候停止，加入普通taq再运行，应该可以加A
还有就是序列有多大，如果没有超过1K，一般普通taq问题都不打

是的，就是楼下所说的Taq plus酶，但是实验室刚好有puf 以及普通Taq，所以就直接混用了。我的扩增片段是700多bp，因为拿到序列后，准备做蛋白表达的，所以才想尽量做到高保真。谢谢你的建议，我会试试看的

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14楼2011-07-01 10:36:06

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