| 查看: 2607 | 回复: 9 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
xiajing_acm新虫 (小有名气)
|
[求助]
流式上机前细胞预处理的困惑
|
||
|
各位大侠： 你们好！ 小弟最近做流式，上机的时候发现流式细胞仪几乎读不了细胞（A549肺腺癌细胞），细胞流量几个每秒，让我郁闷的不行！当时不知道是什么原因，时候查看流式管里的细胞才发现：里面的细胞大部分还是呈絮状的白色沉淀存在，我才知道是细胞没有混悬好，没有以单个细胞的形式存在。可我有几点疑问： 1、PI单染的细胞我是用70%的乙醇固定过夜的，第二天发现细胞就沉在流式管的底部（絮状）。70%的乙醇用的时候是现配现用的，没有预冷，沉淀不知道跟这有没有关系呢？有的资料说在固定时应该先加PBS混悬细胞后再加乙醇到70%浓度比较好，说直接加70%乙醇细胞难被吹散，不知道是不是这样呢？ 2、在用PBS洗过，加PI后，我用枪头混悬了可是看到细胞已经被吹散了啊？然后避光孵育了差不多1个小时。上机的时候没有仔细检查流式管内的细胞，就直接上机了！ 3、Annexin V-PI双染（说明书上没要求固定，我就没有固定）我是用PBS混悬，然后离心，按试剂盒上说明加入反映试剂，然后也混悬了比较久的！ 4、还有一点，会不会是A549细胞本身的一些特点，比如易粘连、易结团等导致其出现细胞沉淀的呢？ 不知做过流式的各位大侠们有没有遇到过相关的问题呢？急切盼望指点一二！非常感谢！ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 细胞 |
» 猜你喜欢
垃圾破二本职称评审标准
已经有18人回复
-
职称评审没过，求安慰
已经有53人回复
-
毕业后当辅导员了，天天各种学生超烦
已经有5人回复
-
26申博自荐
已经有3人回复
-
A期刊撤稿
已经有4人回复
-
EST投稿状态问题
已经有7人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 【教程】流式细胞仪入门【原创】
已经有88人回复
- 流式细胞术详解 22章节
已经有185人回复
- 流式细胞仪常用方法
已经有128人回复
- 【教程】流式细胞仪标本的制备
已经有93人回复
- 【求助】求助关于流式细胞的细胞周期检测结果分析
已经有7人回复
- 【求助/交流】流式细胞仪是干什么用的
已经有20人回复
- 【求助/交流】流式 细胞数量问题
已经有6人回复
- 【求助/交流】流式细胞仪的样品测定前可以冻存吗？
已经有6人回复
- 【求助】流式细胞仪细胞凋亡研究方面
已经有15人回复
7楼2011-07-12 20:15:30
【答案】应助回帖
★ ★
westzilch(金币+1): 谢谢交流！ 2011-06-29 00:07:18
xiajing_acm(金币+5): 非常感谢指点！ 2011-06-29 20:56:37
qinhy(金币+1): 多谢应助回帖~~~ 2011-07-10 19:45:27
westzilch(金币+1): 谢谢交流！ 2011-06-29 00:07:18
xiajing_acm(金币+5): 非常感谢指点！ 2011-06-29 20:56:37
qinhy(金币+1): 多谢应助回帖~~~ 2011-07-10 19:45:27
|
你可以取一点你的分散液，在上机前在倒置显微镜下看看细胞状态 固定的时候是有沉淀的，这个现象是正常的， PI加药后15min就可以上机检测，最好在1小时内检测完毕，孵育实验太久，因PI的毒性使细胞坏死 Annexin V-PI双染，不用固定，孵育15min直接检测 A549细胞没有做过，不清楚，做周期和凋亡和细胞还是有很大关系的，祝好运 |
2楼2011-06-28 19:56:29
sntyc
木虫 (正式写手)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 4961.9
- 散金: 1170
- 红花: 9
- 帖子: 438
- 在线: 300.2小时
- 虫号: 445105
- 注册: 2007-10-27
- 性别: MM
- 专业: 抗肿瘤药物药理
3楼2011-06-28 23:55:54
xiajing_acm
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 11.5
- 散金: 45
- 帖子: 86
- 在线: 35.9小时
- 虫号: 922931
- 注册: 2009-12-08
- 专业: 抗肿瘤药物药理
4楼2011-06-29 20:59:16