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阁

[交流] RNA的测量方法

求教：
       我这里遇见一点问题，是关于RNA的定量分析的，我查了一些文献说可以用紫外分光光度计，但是均未指明其参照试剂是什么，这里求教一下有谁用过该方法的，请给予指导.................十分感谢Sample TextSample TextSample Text
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1楼 2006-10-18 17:41:27
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ftfget1

非灌水,刚才楼主把这个帖子发到论坛事务版了

[ Last edited by ftfget1 on 2006-10-18 at 17:54 ]
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2楼2006-10-18 17:47:09
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ajian1982

金虫 (小有名气)
★ ★
killl(金币+2):感谢参与应助，欢迎多来求助板块帮助别人。
详细见   芝加哥大学研制出在活细胞中测量RNA合成的方法
      Cluzel和他的同事通过使用一种叫做荧光相干光谱学（FCS）技术监控了RNA合成和开启、关闭活细胞中基因的DNA启动子片段。
　　首先，他们使用一种能与MS2蛋白结合的RNA分子。这种MS2蛋白还能结合一种绿色荧光蛋白。在没有RNA时，MS2与荧光蛋白快速结合；当与RNA结合时，这种融合蛋白移动的速度就变得很缓慢。根据运动速度的差异，研究人员能够推断出RNA在一定体积和一个单独活细胞中的浓度。
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我思故我在
3楼2006-10-18 18:20:29
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windfall_0304

金虫 (小有名气)

受伤了，失落中
★ ★
killl(金币+2):感谢参与应助，欢迎多来求助板块帮助别人。
RNA的紫外定量测定方法与蛋白质,核酸等的紫外测定方法大致相同.找到合适的显色剂与RNA相作用，然后以据吸光度的不同建立工作曲线，也就是通常所说的标准曲线法。这样的文献比较多。楼主可以找几篇看看。好像不需要参照试剂。
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走过，请留下脚印，让我能踏着你的足迹前进。
4楼2006-10-18 18:39:03
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wangp249

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 阁 at 2006-10-18 05:41 PM:
求教：
       我这里遇见一点问题，是关于RNA的定量分析的，我查了一些文献说可以用紫外分光光度计，但是均未指明其参照试剂是什么，这里求教一下有谁用过该方法的，请给予指导.................十分感谢[size= ...

根本行不通！！！

紫外分光光度计只能用来粗粗测定DNA的量

常用的mRNA定量方法有四种：northern杂交，原位杂交，RNAse保护分析，反转录聚合酶链反应（RT－PCR）。还有一种方法为cDNA阵列分析，但由于价格昂贵，使用受到很大的局限。
Northern分析是唯一能够提供mRNA大小、RNA样品的完整性和剪接方式改变等信息的方法。
原位杂交是最复杂的方法，也是能够对组织细胞进行定位分析的唯一方法。RNAse保护分析可定位转录的起点和终点，以及内含子和外显子的边界，可对大小相似的mRNA分子进行区分（因为其在northern杂交中的迁移位置相似）。
以上三种方法的缺点是敏感性相对较低。
RT－PCR方法是目前检测基因表达方式和比较不同样品中mRNA表达水平最常用的方法，敏感，快速，重复性和稳定性也很好，可以进行半定量检测（主要是内参照竞争法）和定量检测。现在比较热门的是实时定量RT-PCR（real-time RT-PCR)，或对mRNA进行相对或绝对定量。
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5楼2007-03-06 23:12:31
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wangp249

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by windfall_0304 at 2006-10-18 06:39 PM:
RNA的紫外定量测定方法与蛋白质,核酸等的紫外测定方法大致相同.找到合适的显色剂与RNA相作用，然后以据吸光度的不同建立工作曲线，也就是通常所说的标准曲线法。这样的文献比较多。楼主可以找几篇看看。好像不需要 ...

分光光度计测mRNA只能测其OD值
哪里能测含量？？？
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6楼2007-03-06 23:14:04
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