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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 5RACE纠结中...
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qq侠客

铜虫 (初入文坛)

[求助] 5RACE纠结中...

一直在用RACE方法克隆基因，5RACE一直做不出来，不是没条带就是测序之后拼接不上，不知道是不是5RACE模板的问题？大家遇到过这种问题吗？5RACE模板用的事TaRaka公司的试剂盒
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1楼 2011-06-22 23:00:18
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vickystt

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 欢迎交流 2011-06-23 15:00:09
qq侠客(金币+2): 2011-06-25 13:20:03
重新设计引物  可能是你引物特异性不够高
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2楼2011-06-22 23:02:45
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qq侠客

铜虫 (初入文坛)
引物设计好几次了，跑出来有条带，有时还比较单一，测序之后也能找到引物就是拼接不上
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3楼2011-06-22 23:20:21
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qq侠客

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by vickystt at 2011-06-22 23:02:45:
重新设计引物  可能是你引物特异性不够高

跑出来条带单一，但是测序之后就是拼接不上，不知道是否是5RACE模板的问题？
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4楼2011-06-22 23:22:05
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vickystt

金虫 (小有名气)
你出来的条带会不会是到哪印务扩增呢？我的是一只没条带……欲哭无泪啊
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5楼2012-02-13 16:51:59
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vickystt

金虫 (小有名气)
会不会是单引物扩增出来的条带呢？
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6楼2012-02-13 16:52:42
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dayulee

木虫 (正式写手)

愚木虫
能扩增出条带，但拼接不上 是什么意思？首先扩增出来的序列是不是你需要的序列，如果是的话，那应该是引物你是不是设计的问题？如果不是你的目的序列，拼接不上肯定是正常的了。我也在做race，也是在摸索中，有的时候扩出来的序列不是目的序列。我觉得在保证模版质量的前提下，引物最关键了。
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好好学习，天天向上
7楼2012-07-26 16:17:47
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