| 查看: 3062 | 回复: 5 | ||
| 本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
佳木的复制品金虫 (正式写手)
|
[求助]
候选基因功能验证
|
|
|
我通过用T-DNA激活标签（35S）插入突变获得抗旱相关突变体，最后确定了T-DNA附近的A、B、C、D四个候选基因，将这四个候选基因分别构建过表达载体，最后得到A、B、C、D四个候选基因的过表达转基因T0苗各30株。 我的目的是要验证这些候选基因哪个是真的跟抗旱相关，请问： 1）我应该用这些过表达的T0苗来做干旱试验？还是用T0繁种得到的T1，然后用过表达的T1来做干旱试验？还是用过表达的T2来做干旱试验？为什么？ 2）如果用T0或T1苗来做验证？需要多少株苗？为什么？（比如我用了30株过表达基因A的T0苗做实验，结果有7株抗旱，23株不抗旱，那怎么去分析这个结果，这个基因A与抗旱相关的吗？如果结果是有23株抗旱，7株不抗旱或者是15株抗旱15株不抗旱，这个结果又该怎么分析呢？） 3）如果用过表达的T2来做实验，由于在T2已经分离了，所以T2植株会有过表达的纯合子和过表达的杂合子，用这个过表达的纯合子和过表达的杂合子做实验有什么区别？ |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有300人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 急，基因池筛选出的多态性引物为什么用构建池的单株验证就重复不出多态性了？
已经有4人回复
- 细胞系的选择，我要做转基因，先在细胞水平上验证，选择什么细胞系好！
已经有8人回复
- PCR验证稳转细胞株中转染进去的基因序列
已经有5人回复
- 2011西北农林科技大学自然基金获批项目
已经有17人回复
- 【求助/交流】基因功能验证
已经有8人回复
- 【求助】一种病害抗性分子标记的筛选
已经有14人回复
gwbk
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 54
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2293.5
- 红花: 24
- 帖子: 529
- 在线: 186.9小时
- 虫号: 1320681
- 注册: 2011-06-11
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
3楼2011-06-21 20:28:22
ydniu
铜虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 14056.6
- 帖子: 788
- 在线: 102.6小时
- 虫号: 963895
- 注册: 2010-03-07
- 专业: 作物种质资源与遗传育种学
2楼2011-06-21 16:25:18
helloxiaobo
新虫 (初入文坛)
- MolEPI: 1
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 22.5
- 红花: 1
- 帖子: 3
- 在线: 1.3小时
- 虫号: 1329301
- 注册: 2011-06-23
- 专业: 作物分子育种
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+6, EPI+1): 很厉害！ 2011-06-23 14:43:58
佳木的复制品(金币+50): 非常感谢！！！ 2011-07-08 15:33:58
西瓜(金币+6, EPI+1): 很厉害！ 2011-06-23 14:43:58
佳木的复制品(金币+50): 非常感谢！！！ 2011-07-08 15:33:58
|
实验设计： 1 需要增加 互补验证的转化体 确定能够互补突变体表型，方能确定该基因为你要寻找的而目标基因。 2 关于实验数据的分析，首先建立抗旱的指标，不能简单的说是抗还是不抗，比如1级，2级，3级等。在T0代，将目标超标达各转化系（以及对照和突变体） 进行抗旱处理，采集各转化系的抗性等级，及其处理前后目标基因表达定量的数据。 3 当然条件许可用T1和T2来做则更好，可以进行三次重复 4 补充一点：超表达的各转化系有不同的抗性水平是正常的，只要按编号罗列上去就可以了。如有目标基因的表达数据与其匹配，则更加 |
4楼2011-06-23 12:46:49
webmasterone752
金虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 4190.8
- 帖子: 651
- 在线: 104.5小时
- 虫号: 498438
- 注册: 2008-02-03
- 专业: 作物生理学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): 看来又是牛人，呵呵～ 2011-06-23 23:15:21
佳木的复制品(金币+50): 非常感谢！！！ 2011-07-08 15:34:08
西瓜(金币+5, EPI+1): 看来又是牛人，呵呵～ 2011-06-23 23:15:21
佳木的复制品(金币+50): 非常感谢！！！ 2011-07-08 15:34:08
|
（1-3）楼主。。档次较高的杂志是不承认T0、T1代得实验结果的啊，也就是说你必须通过T3代来筛选出纯合后用T3代进行实验；同时，至少给出4以上line说明同一表型，才能去说服他们相信你的结果。 因此你ABCD四个基因分别获得了30棵苗，这是个很好的开始啊。虽然后续的筛选工作量大些，但是是很有希望获得好结果的。 最后如果得出结论是ABCD中某个基因有功能，再做它的过表达等等。。。 希望回复对你有帮助。 |
5楼2011-06-23 22:07:14
