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佳木的复制品金虫 (正式写手)
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[求助]
候选基因功能验证
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我通过用T-DNA激活标签（35S）插入突变获得抗旱相关突变体，最后确定了T-DNA附近的A、B、C、D四个候选基因，将这四个候选基因分别构建过表达载体，最后得到A、B、C、D四个候选基因的过表达转基因T0苗各30株。 我的目的是要验证这些候选基因哪个是真的跟抗旱相关，请问： 1）我应该用这些过表达的T0苗来做干旱试验？还是用T0繁种得到的T1，然后用过表达的T1来做干旱试验？还是用过表达的T2来做干旱试验？为什么？ 2）如果用T0或T1苗来做验证？需要多少株苗？为什么？（比如我用了30株过表达基因A的T0苗做实验，结果有7株抗旱，23株不抗旱，那怎么去分析这个结果，这个基因A与抗旱相关的吗？如果结果是有23株抗旱，7株不抗旱或者是15株抗旱15株不抗旱，这个结果又该怎么分析呢？） 3）如果用过表达的T2来做实验，由于在T2已经分离了，所以T2植株会有过表达的纯合子和过表达的杂合子，用这个过表达的纯合子和过表达的杂合子做实验有什么区别？ |
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2楼2011-06-21 16:25:18
gwbk
木虫 (正式写手)
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3楼2011-06-21 20:28:22
helloxiaobo
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【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+6, EPI+1): 很厉害！ 2011-06-23 14:43:58
佳木的复制品(金币+50): 非常感谢！！！ 2011-07-08 15:33:58
西瓜(金币+6, EPI+1): 很厉害！ 2011-06-23 14:43:58
佳木的复制品(金币+50): 非常感谢！！！ 2011-07-08 15:33:58
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实验设计： 1 需要增加 互补验证的转化体 确定能够互补突变体表型，方能确定该基因为你要寻找的而目标基因。 2 关于实验数据的分析，首先建立抗旱的指标，不能简单的说是抗还是不抗，比如1级，2级，3级等。在T0代，将目标超标达各转化系（以及对照和突变体） 进行抗旱处理，采集各转化系的抗性等级，及其处理前后目标基因表达定量的数据。 3 当然条件许可用T1和T2来做则更好，可以进行三次重复 4 补充一点：超表达的各转化系有不同的抗性水平是正常的，只要按编号罗列上去就可以了。如有目标基因的表达数据与其匹配，则更加 |
4楼2011-06-23 12:46:49
webmasterone752
金虫 (正式写手)
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【答案】应助回帖
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西瓜(金币+5, EPI+1): 看来又是牛人，呵呵～ 2011-06-23 23:15:21
佳木的复制品(金币+50): 非常感谢！！！ 2011-07-08 15:34:08
西瓜(金币+5, EPI+1): 看来又是牛人，呵呵～ 2011-06-23 23:15:21
佳木的复制品(金币+50): 非常感谢！！！ 2011-07-08 15:34:08
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（1-3）楼主。。档次较高的杂志是不承认T0、T1代得实验结果的啊，也就是说你必须通过T3代来筛选出纯合后用T3代进行实验；同时，至少给出4以上line说明同一表型，才能去说服他们相信你的结果。 因此你ABCD四个基因分别获得了30棵苗，这是个很好的开始啊。虽然后续的筛选工作量大些，但是是很有希望获得好结果的。 最后如果得出结论是ABCD中某个基因有功能，再做它的过表达等等。。。 希望回复对你有帮助。 |
5楼2011-06-23 22:07:14
6楼2011-07-07 14:36:10
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