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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 原生质体再生
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1035110

新虫 (初入文坛)

[求助] 原生质体再生

最近小弟在做链霉菌的原生质体转化，但是原生质体做好后在板上，总是不怎么长，
请问：原生质体的再生和哪些因素有关阿？最关键的因素是什么阿？
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1楼 2011-06-18 15:30:24
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

1035110(金币+1): 2011-06-19 10:19:31
渗透压保护剂加了吗？
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2楼2011-06-18 15:34:18
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1035110

新虫 (初入文坛)
加了，加的蔗糖，但最后就是不长，不知道是不是最后那个再生板有问题。我用的R2YE板
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3楼2011-06-19 10:20:28
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 克隆大虾 at 2011-06-18 08:34:18:
渗透压保护剂加了吗？

可以试试MS或者SFM培养基，渗透压1M山梨醇试试
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4楼2011-06-19 21:47:55
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1035110

新虫 (初入文坛)
之前做的时候，R2YE 加了磷酸二氢钾，氯化钙，脯氨酸和氢氧化钠

这些东西在原生质体再生过程中都起什么作用啊，请教！
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5楼2011-06-19 22:51:58
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1035110

新虫 (初入文坛)
氢氧化钠是不是很关键？也就是说，PH对原生质体再生是不是很关键？
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6楼2011-06-19 22:52:52
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1035110

新虫 (初入文坛)
涂板的时候有没有什么特别的讲究？涂布棒会不会把菌涂死？
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7楼2011-06-19 22:54:53
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plumplumgxc

金虫 (正式写手)
原生质体都死了吧
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科研这条道不好走啊。。。
8楼2011-06-21 10:19:14
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icz

金虫 (小有名气)
原生质体不长有两个原因：
1、原生质体已死，可能是渗透压不够破裂、涂布破裂或者转化电压太高电击死了，我一般不涂布的，加入软琼脂培养基后倾倒摊匀即可；
2、细胞壁破损太严重，无法再生。考虑调整 原生质体制备条件。
至于培养条件，一般不会出现不长的情况，只是长得好坏。另外，确保培养基中没有添加抑制你培养微生物的抑制剂。
建议：针对以上几种情况，仔细检查试验设计，稀释过程中是否有渗透压太低情况。
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今生的追求大于我的生命!
9楼2011-06-21 13:41:13
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1035110

新虫 (初入文坛)
嗯，明白了，谢谢啊，可能是我溶菌酶处理时间过长了
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10楼2011-06-21 17:51:59
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