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paulajjh

木虫 (著名写手)


[交流] 纯化酶的过程中如何达到4度的要求

如题,本人从事酶纯化已经有4年,纯化的酶也有差不多10个吧,有的酶对温度不敏感,中间所有的过程就不用考虑温度这个因素,有的酶很敏感,如果不低温,就很容易失活,纯化到最后得到的酶量很少了。
文献上在提到大部分酶的纯化时,都会提到,在4度进行,但这个条件很难达到,特别是大批量纯化时,耗时长,步骤多,量多,即中试纯化酶如何达到低温的要求啊?
以前在实验室有看到采用层析柜,还有专门的冷室,自己也有将室内空调温度打低的做法,当然该方法不科学,实验重复性也不好。
故请教各位虫虫,你们纯化酶时都是怎样做的?或者你们周围都采用怎样的方法控制低温?
或者可否定做大一点点层析柜,将所需的东西都放到里面,人在外面观察?整个冷室是不是电脑放进去也可以?
思路还是比较乱,请大家多给些建议,谢谢了
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Poincare2010

银虫 (小有名气)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
paulajjh(金币+1): 恩 2011-06-21 15:59:41
引用回帖:
Originally posted by Poincare2010 at 2011-06-19 15:15:17:
我没有做过,但是见过我们实验室的人做过。样品是在层析柜里面,那个层析柜体积很大,高约等于2.5M,宽1-2米,里面确实是放着阿卡塔自动纯化系统(4度环境),人不用进去,控制他的电脑放在层析柜的外面。人隔着玻 ...

我没做过,真的不知道呀。不过层析柜有专门卖的,你可以到网上搜一下,AKATA纯化系统一般都放在里面
7楼2011-06-20 21:44:49
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Poincare2010

银虫 (小有名气)


★ ★ ★
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看天(金币+2): 2011-06-19 17:37:25
paulajjh(金币+5): 柱体积有多大?处理量有多大?可否进一步说明,谢谢。另外层析柜可否定做 2011-06-20 10:59:32
我没有做过,但是见过我们实验室的人做过。样品是在层析柜里面,那个层析柜体积很大,高约等于2.5M,宽1-2米,里面确实是放着阿卡塔自动纯化系统(4度环境),人不用进去,控制他的电脑放在层析柜的外面。人隔着玻璃能看到里面的东西,具体数据。出峰时间有电脑来检测,记录。

[ Last edited by Poincare2010 on 2011-6-19 at 15:17 ]
2楼2011-06-19 15:15:17
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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
paulajjh(金币+1): 没有纯化过,但是想跟你确认下,你的淀粉酶酶活测定方法是怎样的?这个酶需要很多离子激活剂的,底物你采用的什么,可给我发站内消息沟通 2011-06-20 11:01:07
楼主有没有纯化过淀粉酶?


有没有试过明明能耐受某个pH值和氯化钠的,但是一挂柱交换之后就测不出活力了?
3楼2011-06-19 15:33:53
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fuming123

木虫 (小有名气)



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paulajjh(金币+2): 专门的大型层析柜?怎样理解专门?每步配置一个?大型是定做的吗?可否进一步说明? 2011-06-20 11:01:59
常规的做法就是尽量整个过程在层析柜做 很多纯化系统都会匹配专门的大型层析柜
6楼2011-06-19 16:37:53
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简单回复
2011-06-19 15:47   回复  
引用回帖:
Originally posted by paulajjh at 2011-06-18 12:28:55: 如题,本人从事酶纯化已经有4年,纯化的酶也有差不多10个吧,有的酶对温度不敏感,中间所有的过程就不用考虑温度这个因素,有的酶很敏感,如果不低温,就很容易失活,纯化到最后得到的酶量很少了。 文献上在提到 ...

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