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paulajjh

木虫 (著名写手)

[交流] 纯化酶的过程中如何达到4度的要求

如题，本人从事酶纯化已经有4年，纯化的酶也有差不多10个吧，有的酶对温度不敏感，中间所有的过程就不用考虑温度这个因素，有的酶很敏感，如果不低温，就很容易失活，纯化到最后得到的酶量很少了。
文献上在提到大部分酶的纯化时，都会提到，在4度进行，但这个条件很难达到，特别是大批量纯化时，耗时长，步骤多，量多，即中试纯化酶如何达到低温的要求啊？
以前在实验室有看到采用层析柜，还有专门的冷室，自己也有将室内空调温度打低的做法，当然该方法不科学，实验重复性也不好。
故请教各位虫虫，你们纯化酶时都是怎样做的？或者你们周围都采用怎样的方法控制低温？
或者可否定做大一点点层析柜，将所需的东西都放到里面，人在外面观察？整个冷室是不是电脑放进去也可以？
思路还是比较乱，请大家多给些建议，谢谢了
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1楼 2011-06-18 12:28:55
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Poincare2010

银虫 (小有名气)
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看天(金币+2): 2011-06-19 17:37:25
paulajjh(金币+5): 柱体积有多大？处理量有多大？可否进一步说明，谢谢。另外层析柜可否定做 2011-06-20 10:59:32
我没有做过，但是见过我们实验室的人做过。样品是在层析柜里面，那个层析柜体积很大，高约等于2.5M,宽1-2米，里面确实是放着阿卡塔自动纯化系统（4度环境），人不用进去，控制他的电脑放在层析柜的外面。人隔着玻璃能看到里面的东西，具体数据。出峰时间有电脑来检测，记录。

[ Last edited by Poincare2010 on 2011-6-19 at 15:17 ]
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2楼2011-06-19 15:15:17
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)
★
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paulajjh(金币+1): 没有纯化过，但是想跟你确认下，你的淀粉酶酶活测定方法是怎样的？这个酶需要很多离子激活剂的，底物你采用的什么，可给我发站内消息沟通 2011-06-20 11:01:07
楼主有没有纯化过淀粉酶？


有没有试过明明能耐受某个pH值和氯化钠的，但是一挂柱交换之后就测不出活力了？
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3楼2011-06-19 15:33:53
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fuming123

木虫 (小有名气)
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paulajjh(金币+2): 专门的大型层析柜？怎样理解专门？每步配置一个？大型是定做的吗？可否进一步说明？ 2011-06-20 11:01:59
常规的做法就是尽量整个过程在层析柜做 很多纯化系统都会匹配专门的大型层析柜
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6楼2011-06-19 16:37:53
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Poincare2010

银虫 (小有名气)
★
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paulajjh(金币+1): 恩 2011-06-21 15:59:41
引用回帖:
Originally posted by Poincare2010 at 2011-06-19 15:15:17:
我没有做过，但是见过我们实验室的人做过。样品是在层析柜里面，那个层析柜体积很大，高约等于2.5M,宽1-2米，里面确实是放着阿卡塔自动纯化系统（4度环境），人不用进去，控制他的电脑放在层析柜的外面。人隔着玻 ...

我没做过，真的不知道呀。不过层析柜有专门卖的，你可以到网上搜一下，AKATA纯化系统一般都放在里面
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7楼2011-06-20 21:44:49
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liuyuexinfei

木虫 (著名写手)
★
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paulajjh(金币+1): 谢谢 2011-06-21 16:00:02
我们实验室的方法同2楼
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8楼2011-06-21 15:10:17
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简单回复
leimiao_hit4楼
2011-06-19 15:47   回复  
引用回帖:
Originally posted by paulajjh at 2011-06-18 12:28:55: 如题，本人从事酶纯化已经有4年，纯化的酶也有差不多10个吧，有的酶对温度不敏感，中间所有的过程就不用考虑温度这个因素，有的酶很敏感，如果不低温，就很容易失活，纯化到最后得到的酶量很少了。 文献上在提到 ...

祝福
qiuxiumei1605楼
2011-06-19 15:53   回复  
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